[发明专利]低分子量PEI-壳聚糖三重复合基因载体及制备方法和应用

权利要求书

1.一种RGD-硫酸软骨素包覆PEI修饰壳聚糖三重复合基因载体，其特征在于它是由RGD多肽修饰硫酸软骨素、pDNA和PE I接枝壳聚糖组成，其中，PEI接枝壳聚糖、pDNA和RGD多肽修饰硫酸软骨素质量比15∶1∶4。

2.根据权利要求1所述的复合载体，其特征在于所述的RGD为c(RGDfK)，氨基酸序列cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe-Lys)。

3.根据权利要求1所述的复合基因载体，其特征在于所述的壳聚糖分子量＝50kDa；PEI分子量＝800；PEI接枝率为27％。

4.一种权利要求1所述的复合基因载体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)壳聚糖在NaOH溶液中浸泡过夜，倒掉上层碱液，加入异丙醇，然后加入过量的氯乙酸，常温放置反应2h，然后在65℃下继续反应3h，冷却，将反应产物加水溶解，10000r/min下离心5min，弃掉不溶物，取上层溶液，加入过量无水乙醇沉淀出白色絮状固体，滤取沉淀，加水溶解，反复溶解沉淀，至pH接近中性，沉淀放入烘箱干燥，得到羧甲基壳聚糖；

2)取羧甲基壳聚糖加水溶解，加入相当于壳聚糖单元摩尔数5倍的PEI，用38％的盐酸调节PH值至5.0，并加入和羧甲基壳聚糖羧基等摩尔的NHS，室温搅拌1h，取和羧甲基壳聚糖羧基等摩尔的EDC，加水溶解，缓慢滴加到上述溶液中，控制速率1h内滴完，室温继续反应24h，将反应液在去离子水中透析5天，冻干，得到PEI修饰壳聚糖；

3)取硫酸软骨素加水溶解，加入相当于硫酸软骨素上羧基摩尔数30％的RGD多肽，加入与RGD多肽等摩尔的EDC和NHS，室温反应24h，反应液在超纯水中透析5天备用，得到RGD多肽修饰的硫酸软骨素溶液；

4)按照计量将pDNA和PEI修饰壳聚糖复合，复合30min后，将其加入到RGD修饰的硫酸软骨素中，继续复合20min，即可。

5.根据权利要求4所述的复合基因载体的制备方法，其特征在于所述的壳聚糖分子量为50KDa，PEI分子量为800。

6.根据权利要求4所述的复合基因载体的制备方法，其特征在于所述的透析袋截留分子量为3500。

7.权利要求1所述的复合基因载体的应用，其特征在于作为高效靶向非病毒基因载体。