[发明专利]BRAF基因突变检测特异性引物和液相芯片

权利要求书

1.一种BRAF基因突变检测液相芯片，其特征是，主要包括有，

(A)针对BRAF的V600E突变位点，分别设计的野生型和突变型ASPE引物对：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物组成，所述tag序列选自SEQ IDNO.25～SEQ ID NO.30中的任2条序列；所述特异性引物是来源于SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2或其反向互补序列中的碱基序列，且特异性引物的3’端的最后3位碱基中的一个碱基为突变位点，所述特异性引物的Tm值在52～58℃之间；

(B)分别包被有特异的anti-tag序列的、具有不同颜色编码的2种微球，所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.36中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；

(C)用于扩增具有V600E突变位点的BRAF基因目标序列的扩增引物。

2.根据权利要求1所述的BRAF基因突变检测液相芯片，其特征是，所述扩增引物为SEQ IDNO.37和SEQ ID NO.38。

3.根据权利要求1所述的BRAF基因突变检测液相芯片，其特征是，所述野生型的特异性引物为SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.7中的一条，所述突变型的特异性引物为SEQ ID NO.8～SEQID NO.12中的一条；或所述野生型的特异性引物为SEQ ID NO.15～SEQ ID NO.19中的一条，所述突变型的特异性引物为SEQ ID NO.20～SEQ ID NO.24中的一条。

4.根据权利要求1-3任一所述的BRAF基因突变检测液相芯片，其特征是，所述tag序列为SEQID NO.25和SEQ ID NO.26。

5.根据权利要求1-3任一所述的BRAF基因突变检测液相芯片，其特征是，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列。

6.根据权利要求5任一所述的BRAF基因突变检测液相芯片，其特征是，所述间隔臂序列为5-10个T。

7.用于BRAF基因V600E突变检测的特异性引物，其特征是，所述特异性引物是来源于SEQID NO.1和SEQ ID NO.2或其反向互补序列中的碱基序列，且特异性引物的3’端的最后3位碱基中的一个碱基为突变位点，所述特异性引物的Tm值在52～58℃之间。