[发明专利]一种蓝藻多糖的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明提供一种从蓝藻中提取分离蓝藻多糖的简单、快捷的方法。属于生化分离技术领域。

背景技术

国内外人员研究表明，藻类具有抗疲劳、抗辐射、抗病毒、抑制肿瘤、抗过敏、增强免疫力等多种功能，这决定了藻类及其活性成分在功能性食品研究与开发方面有着广阔的应用前景。海藻多糖的生物活性主要表现在抗凝血、抗病毒、免疫调节和抗肿瘤等作用，其生物活性与多糖的化学组成及糖苷键构型、多糖的取代基特别是硫酸基的存在及含量、多糖的空间结构、多糖的分子量大小等有关。

关于红藻、褐藻及绿藻的多糖及其生物活性的研究报道已经较多，但对蓝藻多糖的研究较少。随着近几年环境污染的加剧，大规模蓝藻爆发事件也时有报道，尤其是2007年夏季太湖蓝藻的大爆发更是引起全国乃至全世界的关注。加强环境治理的同时，如果能从蓝藻中开发出有利用价值的多糖物质，将其应用于食品、医药等领域，就会达到变废为宝的目的。

我国目前的经济微藻的开发和利用处于初级加工阶段，海藻多糖的提取及分离纯化多停留在实验室研究阶段，已报道的有关藻类多糖的专利技术，例如中国专利CN1297948A、CN1397567A、CN101445565A等采用等电点法、sevage法、三氯乙酸法等去蛋白质，离子交换柱纯化多糖，虽然使得多糖的纯度得到一定程度的提高，但生产成本增加，过程繁琐；CN1392360A、CN101037483A运用具有活性氨基与羟基的阳离子生物絮凝剂壳聚糖或改性淀粉、或溶于水时电离出磺酸根的阴离子型絮凝剂提取海藻多糖，加入量为50ppm～500ppm，且价格相对无机高分子或聚丙烯酰胺类絮凝剂较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种蓝藻多糖的分离纯化方法，通过聚铁或聚丙烯酰胺类絮凝剂处理蓝藻多糖粗提液，从而简化蓝藻多糖的分离纯化步骤，降低生产成本，提高生产强度，获得纯度较高的蓝藻多糖，应用于保健食品、新药等的研究开发。

本发明的技术方案：一种蓝藻多糖的分离纯化方法，步骤为：

(1)蓝藻多糖粗提取液的制备；(2)絮凝剂处理蓝藻多糖粗提取液；(3)减压浓缩；(4)乙醇沉淀蓝藻多糖；(5)沉淀进行洗脱、真空干燥，最终获得纯度84％以上的蓝藻多糖。

所述的方案，步骤(1)中，蓝藻多糖粗提取液的制备，采用水作提取剂，藻粉或鲜藻与水的固液质量比为1∶20～30，搅拌均匀后浸泡1h，置于80～100℃下加热搅拌4h后，蓝藻破壁液3800～6000r/min离心10-15min，所得离心后清液，即为蓝藻多糖粗提取液；

所述的方案，步骤(2)中，在容器中加入蓝藻多糖粗提取液，添加絮凝剂工作液，絮凝剂在蓝藻多糖粗提取液中的含量为5ppm～50ppm，先快速搅拌1min(200r/min)，再慢速搅拌15min(50r/min)，室温下静置0.5～24h后，3800r/min离心15min，沉淀去除，得到上层液体；所述的絮凝剂为聚铁或聚丙烯酰胺类絮凝剂；

所述的方案，步骤(3)中，将步骤(2)中获得的液体旋转蒸馏得浓缩液，浓缩液体积为液体未浓缩前体积的1/10；

所述的方案，步骤(4)中，将步骤(3)中获得的浓缩液加入1～10倍体积的95％乙醇，搅拌均匀后置于-4℃冷藏过夜，3800r/min离心15min，得到沉淀；

所述的方案，步骤(5)中，将收集的沉淀用丙酮、乙醚各洗脱两次，洗脱后的沉淀真空干燥，得到纯度84％以上的蓝藻多糖。

蓝藻的种类为蓝藻或螺旋藻干粉，或取自野外的由多种微藻组成的太湖水华蓝藻。

絮凝剂处理蓝藻多糖粗提取液，配置的聚铁絮凝剂的工作液为质量浓度5％的水溶液，相对分子质量高达1×10⁵；聚丙烯酰胺类絮凝剂选用阳离子聚丙烯酰胺FO4240SH、阴离子聚丙烯酰胺AN926SHu或非离子聚丙烯酰胺FA920VHM，其工作液浓度均为质量浓度0.1％的水溶液。以上几种聚丙烯酰胺类絮凝剂均是由江苏特麦高科环境技术有限公司提供。

本发明的有益效果：本发明与现有技术相比，主要具有以下优点：1.采用本发明的方法所得的多糖纯度最高可达91.18％。2.本发明所采用的方法操作简单，简化了纯化过程的步骤，减少了对化学试剂的使用量，节约了资源，适用于大规模工业化应用。3.本发明从蓝藻中提取多糖，对资源的综合利用具有重要意义，有效地解决藻类资源的利用和高值化问题。

具体实施方式

实施实例1

(1)蓝藻多糖粗提取液的制备