[发明专利]重组甜菜夜蛾核多角体病毒制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物杀虫剂的领域，涉及一种改良的生物杀虫剂以及相关制备工艺。

背景技术

昆虫病毒是以昆虫为宿主，并可以在其种群中引发流行病的一类病毒。与大量使用的传统化学杀虫剂相比，以昆虫病毒为有效成分的病毒杀虫剂具有以下特点：防治效率高，不仅使用剂量极低，而且可以达到持续控制的效果；对人、畜、非靶标动物安全，保护天敌；极大减少了环境、食物的化学品残留；增加了应用环境的生物多样性；剂型便于储运，有较长的货架寿命；适合常规施药方法，与害虫综合防治系统相容性好，正显示日益强大的生命力。但是，野生型的昆虫病毒用作杀虫剂也存在很多限制。与化学杀虫剂相比，病毒杀虫剂杀虫速度慢，在害虫被控制以前，可能已经造成了较大的损失。病毒杀虫剂还有对紫外线敏感，需要活体增殖等缺点。另外，病毒对宿主的专一性导致的杀虫谱狭窄也限制了其作为生物防治因子的广泛应用。为提高昆虫病毒对宿主的杀虫效率，可以通过基因工程技术手段改造野生型病毒，提高病毒杀虫剂的杀虫效率、拓宽杀虫谱。已经有多篇报道关于构建重组病毒杀虫剂研究。甜菜夜蛾核多角体病毒SeMNPV基因组中UDP葡萄糖基转移酶基因(ecdysterioidUDP-glucoferase gene，egt)编码蜕皮激素是一个重要的杆状病毒调控基因。它可以通过把葡萄糖、半乳糖与蜕皮甾类激素偶联而使后者失活，抑制宿主蜕皮和化蛹，以利于病毒在幼虫体内增殖。研究表明，将egt基因失活构建的重组SeMNNPV可以使甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)幼虫的死亡速度比野生型缩短1-2天，同时感染的幼虫取食量显著减少，死亡时间也显著提前。

昆虫病毒杀虫剂规模化生产目前都以虫体增殖的方式进行，具有投资少、生产工艺简单、成本适中等优点。重组病毒由于删除了影响昆虫生长的基因，导致增殖时宿主表现出进食少、发育缓慢、虫体小、死亡快等症状，因而影响重组病毒的收获。重组病毒对其它非目标昆虫的影响很小，对人畜、天敌和环境安全。其次，杆状病毒的杀虫效果较好，如在虫害发生前期使用，其防治效率可达99％以上。此外，杆状病毒产生的包涵体是具有侵染性的病毒颗粒，对环境的生物稳定性有一定作用；同时，杆状病毒的这种特点也便于利用传统技术来制造和应用病毒。由于杆状病毒的上述特点，特别是它对人畜、天敌和环境比较安全，因此，它是生产绿色食品必不可少的生物农药，其市场前景看好。从1985年我国在湖北蒋湖农场投资建立我国第1个棉铃虫病毒杀虫剂工厂以来，已有多种病毒杀虫剂研制成功并进入批量生产，在发展“无公害”蔬菜生产中发挥了重要的作用。

昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象，这有利于病毒向周围环境中扩散。目前已报道的重组杆状病毒基本都是病毒基因经过重组或缺失，导致病毒部分非必需基因缺失，如组织蛋白酶基因(viralcathepsin，v-cath)，又称半胱氨酸蛋白酶基因cp缺失的重组病毒AcMNPV感染昆虫后，不能导致宿主的液化。这样，不利于病毒向环境扩散，是目前重组杆状病毒作为生物杀虫剂的一个弊端。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组甜菜夜蛾核多角体病毒制剂，在感染昆虫后能有效地导致昆虫出现液化现象，利于病毒向周围环境中扩散，既可实现重组病毒感染后让寄主液化，有利于病毒的流行传播，同时又保持了重组病毒的高毒力，提高病毒在田间的防治效果，而且产品质量稳定，分散性好，易保藏，方便运输，货架寿命长。

本发明所述的重组甜菜夜蛾核多角体病毒制剂，包括以下组分，按重量比为：核多角体病毒混合悬液1-10；载体74-94.5；分散剂1-4；润湿剂1-4；光保护剂0.5-4；以及展着剂1-4；其中，核多角体病毒混合悬液包括：重组甜菜夜蛾核多角体病毒悬液与野生型甜菜夜蛾核多角体病毒悬液，两种病毒菌均为500亿PIB/g，按重量比3∶1混合。

载体可选自：轻质碳酸钙、滑石粉、硅藻土、高岭土、膨润土中的一种或几种的混合物。分散剂和湿润剂可选自：木质素磺酸盐、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、脂肪醇乙氧基化物、烷基酚乙氧基化物、十二烷基磺基琥珀酸钠、聚羧酸盐中的一种或几种的混合物。光保护剂可选自：维生素B2、活性炭、淀粉、荧光增白剂中的一种或几种的混合物。上述载体、分散剂、湿润剂和光保护剂均为市售产品。

本发明还提供了所述的重组甜菜夜蛾核多角体病毒制剂的制备方法，其生产、加工过程污染小，易保藏。

本发明所述的重组甜菜夜蛾核多角体病毒制剂的制备方法，包括以下步骤：