[发明专利]微生物发酵生产低温植酸酶的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵生产低温植酸酶的方法，其包括以下步骤：

(1)将产生植酸酶的微生物逐级低温驯化，驯化温度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→15℃→12℃，使其在低温环境中生长良好；

(2)按常规方法将低温驯化后的植酸酶产生菌在12～18℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；

(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的4～10％接种量接入液体发酵培养基中，在12～18℃培养72～144h，即微生物发酵生产低温植酸酶结束；

(4)将(3)的发酵液在6,000～10,000rpm离心收集液体，收集到的液体即为粗酶液；

(5)根据不同需要和使用对象不同，将(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中菌种低温驯化培养基、液体种子培养基、产酶培养基分别为：

①菌种低温驯化培养基：植酸钙0.5～2g、葡萄糖20～40g、NH₄NO₃ 3～8g、KCl0.3～0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.3～0.5g、MnSO₄·4H₂O 0.01～0.03g、FeSO₄·7H₂O 0.01～0.03g、琼脂20g、蒸馏水1L、pH 5.5，121℃高压蒸气灭菌30min。

②液体种子培养基：葡萄糖30～50g、蛋白胨6～10g、硫酸铵1～2g、KCl 0.3～0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.3～0.5g、蒸馏水1L、pH值5.5，121℃高压蒸气灭菌30min。

③产酶培养基：葡萄糖30～60g、蛋白胨6～10g、硫酸铵1～2g、KCl0.3～0.5g、MgSO₄·7H2O 0.3～0.5g、蒸馏水1L、pH值5.5，121℃高压蒸气灭菌30min。