[发明专利]林荫银莲花的离体快速增殖方法及应用

权利要求书

1.一种林荫银莲花的离体快速增殖方法，其步骤如下所述：

A、不定芽的增殖培养

1)选择经初代培养于MS，附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，萘乙酸0.2mg/L，蔗糖30g/L 和琼脂0.8％的培养基上诱导出的林荫银莲花不定芽，在无菌条件下将其分切成0.5～1.0 cm²的芽块；

2)将步骤1)的芽块接种于1/2MS，附加6-苄基腺嘌呤1.0mg/L，萘乙酸0.4mg/L， 激动素0.5mg/L，水解酪蛋白250～750mg/L，琼脂0.8％和蔗糖20～30g/L的培养基上， 培养温度为17±2℃，光照强度为3000Lux，光照周期为12h/d，培养周期为30d，以得 到不定芽；

B、拟球茎诱导

1)选择经A步骤增殖培养后获得的不定芽为外植体，在无菌条件下去除叶片，将其 分切成0.5～1.0cm²的芽块；

2)将步骤B 1)的芽块接种于MS，附加6-苄基腺嘌呤1.0mg/L，萘乙酸0.4mg/L、 激动素0.5mg/L，水解酪蛋白500mg/L，琼脂0.8％和蔗糖20～30g/L的培养基上，培养 温度为17±2℃，光照强度为3000Lux，光照周期为12h/d，培养周期为30d，得到健壮 的无菌芽苗；

C、生根培养

1)将步骤A或步骤B培养得到的直径为≥1cm，高为≥1.5cm的不定芽或无菌芽苗 为外植体，除去其叶片，将其基部分切为1cm²的芽块；

2)将步骤C 1)的芽块接种于1/2MS，附加萘乙酸0.5mg/L，吲哚丁酸0.5mg/L， 琼脂0.75％和蔗糖20～40g/L的培养基上，培养温度为4±0.5℃，暗培养，培养周期为 40d，获得带根无菌苗；

D、炼苗移栽

1)取步骤C的带根无菌苗，洗去无菌苗根部的培养基，将所述的无菌苗放入体积比 为8∶2的潮土和沙子组成的基质中，无菌苗植株上覆盖纱布，置于5～6℃的冰箱中，7～10 d后取出，使其炼苗；

2)将炼苗后的无菌苗培养至芽直径为≥3cm，再生根条数为≥6，并移栽于大田中，保持 移栽温度为15℃。