[发明专利]一种芽孢杆菌饲料添加剂的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种芽孢杆菌饲料添加剂的制备工艺，属于饲料添加剂领域。

背景技术

作为抗生素的替代品，微生态制剂凭借其独特的调节肠道菌群的功能，正越来越受到饲料业界人士的关注，目前市场上已有微生态制剂产品。但是，市场上的微生态制剂存在以下几个方面的主要质量问题：(1)活菌含量低；(2)水分含量偏高，这是影响微生态制剂质量的重要因素之一；(3)不耐抗生素；(4)对胃酸和胆盐不稳定，致使只有少数菌株进入肠道后仍具有活性，达不到发挥作用所需的活菌数量。由于微生态制剂存在的这些质量问题，从而影响了其在动物上的应用效果，限制了微生态制剂的广泛应用。微胶囊包被法可提高产品中活菌的数量，但通过此法得到的产品价格昂贵。因此，只有找到一种既有良好的生物学功能又具有很强抗性的菌株，同时，找出一种制备工艺简单，成本低，但能很好保持菌株活性的制备工艺，才能从根本上解决微生态制剂存在的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种芽孢杆菌饲料添加剂的制备工艺，该工艺制备过程简单，所用的菌株有优良的生物学活性，本发明的制备工艺所制得的饲料添加剂具有良好的耐胃酸、耐胆盐、耐高温、耐受常用抗生素等抗逆性能及抑制病原菌等益生功能，能够和抗生素联用；产品活菌含量高、保存时间长，应用效果明显且稳定。

本发明的发明点在于：1、地衣芽孢杆菌，为大北农自己分离得到，与现有该类菌株相比，有良好的抗逆性能和抑制病原菌等益生功能；2、制备工艺：工艺简单，制得产品活菌含量的提高；3、本发明的含地衣芽孢杆菌的饲料添加剂。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一种芽孢杆菌饲料添加剂的制备工艺，该工艺包括下述步骤：

1)地衣芽孢杆菌的培养，得种子液；2)地衣芽孢杆菌的液体发酵培养，种子液的接种量为3～10％，发酵至菌数达1-2×10¹⁰cfu/ml；3)离心收集菌体；4)菌体冻干：将收集的菌体中加入冻干保护剂，移入冻干机中进行冷冻真空干燥，成为冻干菌粉；5)冻干菌粉中加入辅料，得芽孢杆菌的饲料添加剂。

其中，本发明所用的芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，此菌为大北农公司从健康动物肠道中分离，选育得到，具有良好的耐胃酸、耐胆盐、耐高温、耐受常用抗生素等抗逆性能和抑制病原菌等益生功能，已于2008年3月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(中国科学院微生物研究所)保藏(简称CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.2384。

本发明中所用的冻干机为真空冷冻干燥机。

本发明所述的地衣芽孢杆菌的培养为三级培养，一级培养：将菌种接种于BPY平板培养基上，于30-37℃培养12-24h，使地衣芽孢杆菌复壮，并形成单菌落，挑取单菌落接种于斜面培养基上，于30-37℃培养24-36h；二级培养：将地衣芽孢杆菌接种于一级BPY斜面培养基上，于30～37℃培养12～16h，使其处于对数中后期，得一级种子；三级液体培养：一级种子用无菌水制成菌悬液，接种到BPY种子培养基中，温度30～37℃，转速200～250rpm，罐压0.05Mpa，通风比：1∶0.6～0.8(14.4～19.2M³/h)，培养10～14h，得二级种子液。

本发明的地衣芽孢杆菌的液体发酵培养过程中，温度为30～37℃，转速220～300rpm，罐压0.05Mpa，通风比：1∶0.6～0.8，培养16～20h，至芽孢形成率90％以上，活菌数为1～2×10¹⁰cfu/ml，则中止发酵，得地衣芽孢杆菌发酵液。所用的培养基为：麸皮1～2％，豆粕1～2％，氯化钠0.2～0.8％，硫酸镁0.01～0.05％。

地衣芽孢杆菌的离心过程中，转速控制在5000rpm以下。

本发明的芽孢杆菌饲料添加剂的制备工艺，所用的冻干保护剂为：脱脂奶粉、甘油、蔗糖、麦芽糊精和谷氨酸钠的混合物，按照：脱脂奶粉∶甘油∶蔗糖∶麦芽糊精∶谷氨酸钠＝2∶0.5～1.0∶0.5～1.0∶0.5～1.5∶0.5～1.0的比例混合而成。

本发明的芽孢杆菌饲料添加剂的制备工艺中，冻干菌粉中加入的辅料可为玉米芯粉、脱脂米糠、玉米蛋白粉、变性淀粉、葡萄糖中的一种或几种的混合物。

本发明的另一目的是提供该芽孢杆菌饲料添加剂的制备工艺所制得的饲料添加剂。