[发明专利]一种东北铁线莲三萜皂苷对照品的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种东北铁线莲三萜皂苷对照品的制备方法。

背景技术

毛茛科植物东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的根及根茎，具有祛风湿，通经络，止痛之功能，用于治风湿性关节炎，神经痛，四肢麻木，肢体疼痛，跌打损伤，鱼刺鲠喉，又用于黄疸性肝炎[严仲铠，李万林.中国长白山药用植物彩色图志[M].北京：人民卫生出版社，1997：170-171.]。东北铁线莲收载于《中华人民共和国药典》2010年版威灵仙项下，含量测定项下采用齐墩果酸和常春藤皂苷元为对照品，高效液相色谱法测定含量以控制药材质量。3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(结构式见下)是东北铁线莲中主要三萜皂苷类化学成分，以其原型三萜皂苷评价东北铁线莲药材质量更为合理。但是目前无法从国内外市场购得3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品。

2006年中国学者史社坡从东北铁线莲的根及根茎中分离鉴定出3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷[Shi S P，Jiang D，Dong C X，et al.Triterpene saponin fromClematis manshurica[J].J Nat Prod，2006，69：1591-1595.]，采用的方法为东北铁线莲的根及根茎乙醇回流提取，提取液浓缩后分别用乙酸乙酯和正丁醇振摇提取，正丁醇提取物经大孔吸附柱色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱和高效液相柱色谱，最后得到此种皂苷单体。3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷是以齐墩果酸为苷元的九糖苷，极性大，正丁醇振摇提取提取率低；硅胶柱色谱有机溶剂消耗量大，回收率低，成本高。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种东北铁线莲三萜皂苷3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品的制备方法。

本案发明人通过对东北铁线莲三萜皂苷类化学成分进行细致深入的研究，发明了东北铁线莲的根及根茎回流提取，提取物经大孔吸附柱色谱和高效液相柱色谱制备3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，经纯度检测大于98％，符合含量测定用中药化学对照品的要求，因而完成了本发明。

本发明提供一种东北铁线莲三萜皂苷3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品的制备方法，该方法包括以下步骤：