[发明专利]一种检测氯霉素的试剂板的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测蜂蜜中氯霉素残留的试剂板的制备方法，具体涉及一种检测氯霉素的免疫胶体金快速检测试剂板的制备方法。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是一种高效广谱抗生素，常用于蜜蜂的各种传染性疾病的治疗。但是，氯霉素存在严重的毒副作用，在蜂蜜中的残留严重威胁人体健康，能引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏症等疾病，长期微量摄入还会诱发致病菌的耐药性、引起机体正常菌群失调。欧盟理事会508/1999/EEC号指令中将氯霉素列入动物性食品中禁用药物。2002年农业部发布第193号公告《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》将氯霉素及其盐、酯列入食品动物禁用兽药名单。同年12月农业部发布第253号公告《动物性食品中兽药残留最高限量》将氯霉素及其盐、酯被列为禁止使用药物，在动物性食品中不得检出。

农业部对氯霉素残留确认的推荐方法为酶联免疫试剂盒ELISA+气相色谱仪确证(农业部1025号公告-21-2008)或气相色谱-质谱法(农业部781号公告-1-2006)，检出限为0.1ppb，定量限为0.2ppb，方法特异性好、准确率高，但存在对设备、环境、操作技能等要求，所需费用高，不利于大规模样本筛选。

相比前述几种方法，免疫胶体金技术将反应时间大大缩短，且操作简单，不需要配备复杂仪器设备，结果直观肉眼可判断。

食品安全关系国计民生，研制开发一种检测限符合要求，重现性好，检测时间短，适合现场快速检测，技术产品或仪器设备成本较低，运行费用低的快速检测试剂迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高，特异性好，简便快速，生产成本低的氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的制备方法。

本发明试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。相邻各部分间有1-2mm的重叠以保证层析作用从样品垫到吸水垫部位的顺利进行。

本发明试剂板的各部分组成成分和功能如下：

塑料模板，起固定背衬和标示各功能区(加样孔、检测区、控制区)的作用。

背衬，由一面涂有不干胶的不吸水韧性材料制成，起固定支撑试剂板其他组成部分的作用。

样品垫，由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液和缓冲样品溶液pH值的作用。

胶金结合垫，由聚酯膜制成，其上有抗氯霉素单克隆抗体与胶体金颗粒的结合物。为样品溶液中有效成分和金标抗体反应提供场所。

硝酸纤维素膜，从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和质控线，将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。

吸水垫，由滤纸制成，将反应过程中多余的溶液吸收。

本发明试剂板具有如下有益效果：

(1)特异性好。本发明试剂板对氯霉素的交叉反应率为100％，对如甲砜霉素、氟甲砜霉素、棕榈氯霉素等抗生素的交叉反应率均低于1％。可见，本发明试剂板对氯霉素反应具有高度专一性。

(2)灵敏度高。本发明试剂板对原蜜、浓缩蜜中氯霉素的检出限为0.1ppb，符合国家限量要求。

(3)操作简单快捷。本发明试剂板将反应所需的大部分原料整合到PVC背衬中，滴样后，抗原抗体反应在固相膜上快速进行，大大缩短检样时间，且样品无需特殊处理，滴样后5-10分钟即可用肉眼通过判断硝酸纤维素膜上的检测线和质控线的颜色深浅读取结果。检测实施过程不依赖任何实验设备，普通人员均可操作，不需专业培训。

(4)成本低，易推广。本发明试剂板生产工艺简单，流程成熟。生产成本低廉，投资少，收效快。

附图说明

图1为氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板背衬结构示意图，其中1为样品垫，2为胶金结合垫，3为硝酸纤维素膜，4为检测线，5为质控线，6为吸水垫，7为不干胶，8为PVC底板。

图2为氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板操作示意图，其中S为加样孔，C为控制区，T为检测区。

图3为氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板结果判定示意图，其中C为控制区，T为检测区。

具体实施方法

本发明试剂板的制备包括氯霉素-载体蛋白偶联物的制备，抗氯霉素单克隆抗体的制备，胶体金溶液的制备，胶体金标记抗氯霉素单克隆抗体的制备和氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的组装。

1.氯霉素与载体蛋白的偶联