[发明专利]一种越橘治疗呼吸道系统疾病有效部位的质量控制方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物的质量控制领域，具体涉及一种越橘提取物的质量控制方法。

技术背景

越橘提取物是从杜鹃花科植物越橘Vaccinium vitis-idaea L的茎、叶按照我们前期申请的中国专利中所公开的提取方法制得的提取物：申请号为200310107623.0、名称为“越橘治疗呼吸道疾病的有效部位及其制备方法”。该提取物主要包括酚苷类和黄酮类，其中酚苷部位主要包含熊果苷、甲基熊果苷、2-O-咖啡酰基熊果苷及其衍生物等；黄酮部位主要包含金丝桃苷、异槲皮苷、匾蓄苷、芦丁、槲皮素及其衍生物等。酚苷类成分为总提取物的45-65％(w/w)，黄酮类成分类成分为总提取物的5-20％(w/w)。

我们对熊果苷的生物活性进行研究，通过抗炎(醋酸致腹膜炎法)、止咳(氨水引咳法)、祛痰(气管酚红排泌法)实验表明：熊果苷和越橘乙醇提取物均有显著的抗炎、祛痰和镇咳作用；越橘总黄酮具有较好的抗菌、抗病毒作用。通过实验证明：越橘总黄酮对白喉杆菌的抗菌作用最强，对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、链球菌(A群)也具有显著作用。越橘总黄酮对感染流感病毒的小鼠有很明显的延长疾病潜伏期及增加存活时间的作用。越橘中所含的金丝桃苷具有抗炎、止咳、祛痰的作用；异槲皮素具有降压、抗炎、平喘、降血脂作用；芦丁具有抗炎、抗病毒作用。因此越橘提取物中的酚苷类和黄酮类都是其治疗呼吸道疾病的有效部位。

基于熊果苷、总黄酮和金丝桃苷的药理活性与越橘提取物活性基本一致，因此在质控中选择熊果苷、总黄酮以及总黄酮中的金丝桃苷作为越橘提取物中的定量检测物质具有非常重要意义，而熊果苷和总黄酮的含量也成为越橘提取物作为原料制剂疗效保证的重要指标。

越橘提取物是我们自主研制的，目前在分析领域文献报道中，尚无与越橘提取物质控的相关内容。为保证制剂所需原料的质量稳定可控，建立越橘提取物的质量控制方法具有很大的意义。

发明内容

由于越橘提取物有两部分成分组成，即以熊果苷为主的酚苷类和以金丝桃苷为主的黄酮类成分组成，因此如何质控提取物中两种有效部位具有较高的难度。本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种可控制提取物质量、保证制剂安全的越橘提取物制剂的质量控制方法。

本发明是这样实现的：

按照天然药物质量标准研究要求，对越橘的活性提取物进行了全面的质量研究。

(1)本品性状为棕褐色干浸膏；气微，味苦。

(2)鉴别方法为薄层色谱法：以氯仿(6～9分)-甲醇(1～3份)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液后，晾干，100～110℃烘至斑点显色清晰。供试品溶液、对照品溶液各2ul，点于同一硅胶G薄层板上，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

其中对照品溶液配制方法为：熊果苷对照品适量用乙醇制成1ml含1mg的溶液；

其中供试品溶液配制方法为：取本品粉末2g，加入甲醇5ml，超声使完全溶解，溶液作为供试品溶液。

(3)检查项内容包括水分、炽灼残渣、重金属、砷盐检查，按照中国药典2005年版一部附录要求的方法测定；

(4)熊果苷含量测定包括以下步骤：分别制备供试品溶液和对照品溶液，用高效液相色谱法测定，其特征是：

色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13～18∶87～82)溶液为流动相；流速0.8～1.0ml/min；检测波长为278～285nm；进样量20ul。理论板数按熊果苷峰计算，不低于2000。

其中对照品溶液的制备方法为：精密称取熊果苷对照品适量，加乙醇制成每1ml含40～80μg的溶液，即得。

其中供试品溶液的制备方法为：取越橘提取物粉术80～120mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，经0.45um微孔滤膜过滤，即得。

(5)总黄酮的测定包括以下步骤：分别制备供试品溶液和对照品溶液，500～520nm波长处测定吸收度。

其中对照品溶液的制备方法为：取金丝桃苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含金丝桃苷165～215μg的溶液，摇匀。分别精密吸取对照品液3.0ml，完全转移至25ml容量瓶中，再加水3.0ml；然后加入0.3～0.7％亚硝酸钠溶液1ml，放置6分钟；再加入8～12％硝酸铝1ml，放置5～10分钟；加入9～11％氢氧化钠10ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置10～20分钟。