[发明专利]一种细菌明胶液化反应显色鉴定法

说明书

一、技术领域

本发明涉及到细菌鉴定相关生化反应试验方法的领域。

二、背景技术

在细菌鉴定中，生化反应是鉴定细菌很重要的方法。明胶液化试验是细菌鉴定生化反应中常用的一种试验，在细菌鉴定中价值很高，特别是在鉴定非发酵菌类时其鉴别意义更高。传统的细菌鉴定明胶液化试验方法是：将细菌接种在明胶培养基中，经37℃孵育24小时左右，观察细菌是否分解明胶。采用这种观察方法需先将明胶培养基放在4℃冰箱中1小时左右，然后取出培养基，并上下摇动观察，如果培养基仍成液体流动状，则明胶液化试验阳性，如成凝固状态则为阴性反应。这种观察方法较为繁琐，给用细菌鉴定组合板和仪器读取结果带来不便。

三、发明内容

本发明将提供一种新的供细菌鉴定用的明胶生化试验培养基配方，其原理是利用蛋白染色剂对明胶大分子蛋白和细菌分解明胶小分子产物染色所产生的颜色不同而建立的一种方法；配方中主要是添加了氨基黑10B试剂，氨基黑10B是一种蛋白染色剂，当细菌分解明胶蛋白后，明胶则由大分子蛋白变成了许多小分子产物；由于蛋白染色剂对明胶蛋白大分子及其分解的小分子产物染色所产生的颜色不同；因此，可通过培养基颜色变化来判断明胶是否被细菌分解液化。该方法可方便地将明胶液化试验选入细菌生化反应编码鉴定组合板中，增加编码组合鉴定细菌能力；给半自动、自动读取细菌明胶液化反应结果提供方便。

四、具体实施方式

明胶液化试验显色法配方：

成份：牛肉膏  0.15g

      蛋白胨  0.25g

       H₂O    50ml

加热溶解后取5ml基础液加入0.5g明胶(10％)

调PH7.6，5ml→0.2ml 1MNaOH

115℃灭菌15分钟，5ml加明胶管迅速加入0.5ml 0.2％氨基黑10B(过滤除菌)，剩余45ml基础液置冰箱保存。

注：(1)明胶不能反复加热溶解，故每次取少量基础液加10％明胶试验方法：培养基可根据反应微孔板的孔径大小选择适当量，细菌接种可选菌液与培养基等量混合法，也可用直接将细菌接种于培养基中；细菌接种后置37℃孵育12至24小时观察结果，培养基变紫色为明胶液化试验阳性，不变色为阴性。