[发明专利]抗骨髓瘤细胞多克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1.骨髓瘤细胞多克隆抗体，其特征在于：用骨髓瘤细胞免疫动物后制得。

2.根据权利要求1所述的骨髓瘤细胞多克隆抗体，其特征在于是由以下方法制得：

a、首次用1×10⁶～5×10⁷个活的骨髓瘤细胞与完全弗氏佐剂免疫动物；

b、然后每隔7～14天加强免疫一次，加强免疫用不完全弗氏佐剂与活的骨髓瘤细胞混合免疫；每次免疫前均检测血液抗体滴度，当抗体滴度达到1∶10000～50000以上终止免疫；

c、终止免疫后取血于室温下放置2～3h后于4摄氏度过夜，然后取上清离心得到含骨髓瘤细胞多克隆抗体的血清，从含骨髓瘤细胞多克隆抗体的血清中纯化制得骨髓瘤细胞多克隆抗体。

3.权利要求1或2所述的骨髓瘤细胞多克隆抗体在制备诊断多发性骨髓瘤的试剂中的用途。

4.权利要求1或2所述的骨髓瘤细胞多克隆抗体在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途。

5.纯化骨髓瘤细胞多克隆抗体的方法，其特征在于：

a、将含骨髓瘤细胞多克隆抗体的血清上样于用10倍柱体积的缓冲液A平衡的柱子，柱子填料为Mabselect，再用5倍柱体积的缓冲液A洗柱子；所述缓冲液A为20mM NaH₂PO₄，0.15M NaCl，pH 7.2；

b、用pH 3.0的0.1M柠檬酸钠作缓冲液B线性梯度洗柱子，直至有洗脱峰的出现；

c、收集洗脱峰液体，同时用pH8.0、1M的Tris-HCl做中和缓冲液，调节洗脱液至pH7.2左右；

d、然后将收集的洗脱液用透析袋置于PH7.2的PBS缓冲液在4摄氏下透析，将透析的收集液冻干即得骨髓瘤细胞多克隆抗体。

6.制备骨髓瘤细胞多克隆抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：

a、首次用1×10⁶～5×10⁷个活的骨髓瘤细胞与完全弗氏佐剂免疫动物；

b、然后每隔7～14天加强免疫一次，加强免疫用不完全弗氏佐剂与活的骨髓瘤细胞混合免疫；每次免疫前均检测血液抗体滴度，当抗体滴度达到1∶10000～50000以上终止免疫；

c、终止免疫后取血于室温下放置2～3h后于4摄氏度过夜，然后取上清离心得到含骨髓瘤细胞多克隆抗体的血清，从血清纯化制得骨髓瘤细胞多克隆抗体。

7.根据权利要求6所述的制备骨髓瘤细胞多克隆抗体的方法，其特征在于所述的步骤d中的纯化包括以下步骤：

将含骨髓瘤细胞多克隆抗体的血清上样于用10倍柱体积的缓冲液A平衡的XK16/40柱，填料为Mabselect；

再用5倍柱体积的缓冲液A洗柱子；用缓冲液B线性梯度洗柱，直至有洗脱峰的出现；收集洗脱峰液体，同时用中和缓冲液调节洗脱液pH7.2左右；

将收集的洗脱液用透析袋置于PBS缓冲液(PH7.2)在4摄氏度下透析，将透析的收集液冻干即得骨髓瘤细胞多克隆抗体；

上述缓冲液A为20mM NaH₂PO₄，0.15M NaCl，pH 7.2pH 9.0；缓冲液B为0.1M柠檬酸钠，pH 3.0；中和缓冲液为1M Tris-HCl，pH8.0。