[发明专利]乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种乙型肝炎病毒前S 1抗原的检测试剂盒。

背景技术

乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV-PreS1)，简称前S1抗原，存在于完整的乙型肝炎病毒Dane颗粒表面，是乙肝病毒外膜蛋白的重要组成部分，参与乙肝病毒的组装、分泌，还可识别肝细胞膜上特异性受体。在正常人的肝细胞膜上存在HBV PreS1受体，当血液循环中存在完整乙肝病毒颗粒时，乙肝病毒颗粒可通过其表面的PreS1与肝细胞膜上存在的HBV PreS1受体结合，进而附着并入侵肝细胞。

乙型肝炎病毒乙型病毒性肝炎是一种易慢性化、重症化的传染病。随着近几年对前S1抗原研究的深入，发现前S1抗原是乙型肝炎病毒感染和复制的重要的血清学标志。前S1抗原与HBV DNA在反映病毒复制方面有良好的一致性。对于HBeAg阴性的慢性乙型病毒性肝炎，前S1抗原的持续阳性，常提示病情呈持续进展及易重症化。前S1抗原滴度的持续下降提示干扰素抗病毒治疗的预期疗效好。因此前S1抗原可作为病毒和复制的重要辅助指标，其滴度的大小在一定程度上反映了病毒复制性与传染性的强弱。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种检测乙型肝炎病毒前S1抗原的试剂盒。所述试剂盒特异性与灵敏度高，稳定性好，变异系数小于15％。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒，包括：

(a)、抗-PreS1抗体；

(b)、酶标抗HBs抗体；

(c)、洗涤液；

(d)、稀释液；

(e)、包被液；

(f)、封闭液；

(g)、显色液；

(h)、终止液。

作为优选，本发明所述试剂盒还包括阴性对照、阳性对照以及对照品稀释液。

作为优选，所述包被液为含Na₂CO₃ 1.59g/L、NaHCO₃2.93g/L的0.05mol/L、pH 9.6碳酸盐缓冲液。

作为优选，所述封闭液为含1％BSA、8.0g/L NaCl、0.2g/L KH₂PO₄、2.9g/L Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g/L KCl、50g/L蔗糖的0.01M、pH7.4磷酸盐缓冲液。

作为优选，所述稀释液为含20％BSA、8.0g/L NaCl、0.2g/L KH₂PO₄、2.9g/L Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g/L KCl、0.03％的Proclin300，适量胭脂红的0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液。

作为优选，所述酶标抗HBs抗体为辣根过氧化物酶标记的抗HBs抗体。

作为优选，所述显色液为含0.40g/LTMB、1.5g/L保护剂B的pH3.0的柠檬酸磷酸盐缓冲液。

作为优选，所述底物液为含6.084g/L NaH₂PO₄、21.848g/LNa₂HPO₄·12H₂O、0.6585g/L过氧化脲、0.5734g/L保护剂A的混合溶液。

作为优选，所述终止液为2mol/L H₂SO₄溶液。

作为优选，所述对照品稀释液为含8.0g/LnaC1、0.2g/L的KH₂PO₄、2.9g/L的Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g/L的KCl3％牛血清白蛋白、pH为7.4的溶液。

本发明应用双抗体夹心法原理，利用抗-PreS1抗体制备包被板，以辣根过氧化物酶标记的抗-HBs抗体作为酶标抗体，通过免疫反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，该复合物中的HRP酶可催化底物显色，显色强度与乙型肝炎病毒前S1抗原的含量成正比，对人血清或血浆中的乙型肝炎病毒前S1抗原进行定性检测。

本发明所述试剂盒适用于半自动或全自动板式酶标仪进行检测，具体使用过程如下：

a、包被、洗板：将抗-PreS1抗体加至酶联板孔内孵育过夜，采用洗涤液洗涤加样孔；