[发明专利]一种体外分子水平荧光法排除筛选药物假阳性结果的方法

权利要求书

1.一种荧光测试样品的制备方法，所述荧光测试样品用于荧光法中目标物质的筛选，所述制备方法包括：

1)向反应板中加入a)生物活性物质，和b)所述生物活性物质的底物，所述底物的两端分别偶联有荧光淬灭基团和荧光发射基团；

2)将1)中所得样品在一定条件下孵育一定时间以达到荧光法可检测的荧光强度；和

3)向2)中所得样品中再加入待测目标物质，得到所述荧光法的荧光测试样品。

2.权利要求1所述的方法，其中，

所述荧光法选自时间分辨荧光法、荧光共振能量转移法、均相时间分辨荧光法、荧光关联光谱法、极化荧光分析法和常规荧光定量法；

步骤1)中所述生物活性物质是酶，优选为切割酶，特别是天冬氨酸蛋白酶家族和半胱氨酸蛋白酶家族的切割酶；

所述生物活性物质的底物为选自酶，优选为切割酶，特别是天冬氨酸蛋白酶家族和半胱氨酸蛋白酶家族的切割酶的底物；

所述荧光淬灭基团选自QSY7、DABCYL、Ac、Dnp；

荧光发射基团选自镧系金属螯合分子、EDANS(5’-(2’-氨乙基氨基奈-1-磺酸))、Mca(甲基香豆素醋酸盐)和AFC(7-氨基-4-三氟甲基香豆素)；

步骤2)中所述一定条件是指反应温度为0～40℃，反应pH值为2～6.8，所述孵育时间为0～24hr；

具体地，所述荧光法为均相时间分辨荧光法，步骤1)中所述生物活性物质为BACE1，所述底物为APP(淀粉样前体蛋白)或突变型APP，所述荧光淬灭基团为QSY7，所述荧光发射基团为铕螯合分子；步骤2)中所述一定条件是指反应温度为20～25℃，反应pH值为4.5，所述孵育时间为6hr。

3.一种按照权利要求1所述方法制备的荧光测试样品【验证组】，其中，

所述荧光法选自时间分辨荧光法、荧光共振能量转移法、均相时间分辨荧光法、荧光关联光谱法、极化荧光分析法和常规荧光定量法；

步骤1)中所述生物活性物质是酶，优选为切割酶，特别是天冬氨酸蛋白酶家族和半胱氨酸蛋白酶家族的切割酶；

所述生物活性物质的底物为选自酶，优选为切割酶，特别是天冬氨酸蛋白酶家族和半胱氨酸蛋白酶家族的切割酶的底物；

所述荧光淬灭基团选自QSY7、DABCYL、Ac、Dnp；

荧光发射基团选自镧系金属螯合分子、EDANS(5’-(2’-氨乙基氨基奈-1-磺酸))、Mca(甲基香豆素醋酸盐)和AFC(7-氨基-4-三氟甲基香豆素)；

步骤2)中所述一定条件是指反应温度为0～40℃，反应pH值为2～6.8，所述孵育时间为0～24hr；

具体地，所述荧光法为均相时间分辨荧光法，步骤1)所述生物活性物质为BACE1；所述生物活性物质的底物为APP(淀粉样前体蛋白)或突变型APP；所述荧光淬灭基团为QSY7；荧光发射基团为铕螯合分子；步骤2)中所述一定条件是指反应温度为20～25℃，反应pH值为4.5，所述孵育时间为6hr。

4.一种用于目标物质筛选的荧光法中的荧光测试样品【筛选组】，其采用如下方法制备：

1)向反应板中加入a)生物活性物质，和b)待测目标物质，在一定条件下孵育一定时间；

2)在1)中加入生物活性物质的底物，所述底物的两端分别偶联有荧光淬灭基团和荧光发射基团，由此得到荧光测试样品【筛选组】。