[发明专利]沙雷氏菌产碱性蛋白酶的方法及其专用培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种沙雷氏菌产碱性蛋白酶的方法，专用于该方法的培养基，该培养基以蛋白胨和酵母膏作为C、N源和能源。

背景技术

碱性蛋白酶在加酶洗涤剂、制革、丝绸等行业均有广泛应用，目前主要应用的工业产酶菌株是地衣芽孢杆菌及短小芽孢杆菌，但芽孢类菌株在产酶的同时会产生大量孢子，给酶的提取带来不便，后处理也较繁琐。粘质沙雷氏菌是一种革兰氏阴性非芽孢细菌，可以产生碱性蛋白酶，且这种蛋白酶分子较大，容易纯化，是工业上生产碱性蛋白酶的优良候选菌株；另外，沙雷氏菌产生的蛋白酶还具有抗肿瘤的药性；但由于其产生的蛋白酶的活性较低，产量也不高，因此在工业生产中并未得到广泛应用。

从昆明冶炼厂周围的废水中筛选到一株能够产碱性蛋白酶的菌株，该菌株可以产生红色色素，且具有多种重金属抗性。生理生化实验和16S rDNA序列分析表明该菌株属于沙雷氏菌属中的粘质沙雷氏菌，命名为KMR-3，以此菌株为出发菌株，对其产生碱性蛋白酶的发酵条件进行了优化。

发明内容

本发明旨在提供一种安全、成本低且可以促进沙雷氏菌(Serratia sp.)KMR-3菌株快速高效产出碱性蛋白酶的沙雷氏菌产碱性蛋白酶的生产方法，及其该方法专用的液体培养基。

为了实现上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

沙雷氏菌产碱性蛋白酶的方法，粘质沙雷氏菌(Serratia sp.)KMR-3菌株在以胰蛋白胨为5-20g/L，酵母膏为2.5-10g/L和水为组分的不含NaCl的改良LB液体培养基中，25℃，pH7-10下培养6-48h。

所述粘质沙雷氏菌(Serratia sp.)KMR-3于2008年8月26日在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”保藏，保藏号为：CGMCCNo.2636。

上述方法，优选胰蛋白胨为10g/L，酵母膏为2.5g/L；pH为8，培养24h。

专用于所述沙雷氏菌产碱性蛋白酶的方法的培养基，以胰蛋白胨10g/L，酵母膏2.5g/L和水为组分，不含NaCl的改良LB液体培养基。

本发明所用的技术方案是使用一种液体培养基，它以胰蛋白胨、酵母膏和水作为培养基配制而成。

本发明利用从昆明冶炼厂周围废水中分离到的一株产红色素的粘质沙雷氏菌(Serratia sp.)KMR-3菌株，其保藏号为：CGMCC No.2636。通过优化培养基的发酵条件及培养基组分，提高其蛋白酶产量。

本发明涉及的粘质沙雷氏菌(Serratia sp.)KMR-3菌株已经于2008年8月26日在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”(中国北京)保藏，保藏号为：CGMCC No.2636。

附图说明：

图1为不同培养时间KMR-3菌株产蛋白酶量；

图2为不同培养时间KMR-3菌株产蛋白酶量。

具体实施方式：

本发明的具体步骤如下：LB(Luria-Bertani)培养基是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌分为液态或加入琼脂制成的固态培养基。以LB液体培养基作为粘质沙雷氏菌(Serratia sp.)KMR-3菌株发酵生产蛋白酶的起始培养基，发酵温度为25℃，pH值为8.0，通过优化LB液体培养基(胰蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L)的不同组分来提高该菌株碱性蛋白酶的产量。优化实验内容为：LB液体培养基，不含胰蛋白胨的改良LB液体培养基，不含酵母膏的改良LB液体培养基，不含NaCl的改良LB液体培养基；通过测定发酵液离心后上清中的蛋白酶含量来评价其产量，结果表明：不含NaCl的改良LB液体培养基可在一定程度上提高蛋白酶产量(图1)，然后又对胰蛋白胨含量和酵母膏含量进行了优化，结果表明：含有胰蛋白胨10g/L，酵母膏2.5g/L的培养基能够促进KMR-3大量、快速产生碱性蛋白酶。(图2)(蛋白酶活性测性方法为福林酚法。)

下面结合附图，用实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：沙雷氏菌属(Serratia sp.)KMR-3菌株碱性蛋白酶的检测：

从昆明冶炼厂周围废水中分离到的一株对多种重金属离子具有高抗性的沙雷氏菌属(Serratia sp.)KMR-3菌株。该沙雷氏菌属(Serratia sp.)KMR-3菌株已经于2008年8月26日在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”(中国北京)保藏，保藏号为：CGMCC No.2636。