[发明专利]一种一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条

说明书

技术领域

本发明属于预防兽医学检验领域，具体是涉及一种一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

鸡新城疫(Newcastle Disease，ND)一直是给养鸡业带来重大危害的疫病，被国际兽医局(OIE)列为A类传染病，该病对世界贸易有较大的商业影响。传染性支气管炎(InfectiousBrochitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的危害呼吸和泌尿生殖道的急性传染病，鸡群一经感染，引起巨大经济损失。目前，鸡病的爆发已发生了一些新的变化，以往那种单纯发生某一种疾病的情况已不多见，取而代之的是几种疫病混合感染、病毒性疫病、隐性慢性疾病日见增多，呼吸道病的发病率超过了肠道病.这些都使鸡病日趋走向复杂化，给鸡病诊断与防治带来一定的难度，特别是鸡新城疫和传染性支气管炎，病鸡的临床症状有很大的差异，不同宿主对感染后的反应也不一样，这使诊断更为复杂和困难，单一临床和病变不能作为诊断的依据。

对禽病毒的检测方法，主要有病毒分离、血清学诊断以及分子生物学方法，但病毒分离时间长，要求条件高，分离率低，而采集患者急性期与恢复期双份血清进行抗体测定来确认，又不能及时进行诊断，因此，使这两种方法在使用中受到很大的限制，而免疫金标法(Immunochromatography Assay)是九十年代初发展起来的，因其快速、操作简便、试剂稳定、可室温储运、不易污染的特点得到广泛的应用。它是免疫亲和技术、印记技术、免疫标记技术和层析技术的组合。将包被抗体、胶体金标记抗体固相化，与样本吸附材料等组合在一起，制备出免疫层析诊断试条，使用时只需要把该试条下插入样品溶液，数分钟就可以判断结果。与免疫渗滤法比较，稳定性好，操作更简便、快速，且由于为干试条形式，无需低温保存，储运也方便，但是目前关于同时检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的装置或者其它的检测工具未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条及其制备方法和应用，能满足现有技术的上述需求。

一种一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，有一底衬、该底衬上面的中部粘帖一包被膜，其特征在于该包被膜中部有一条包被鸡新城疫病毒的抗体的检测线、一条包被鸡传染性支气管炎病毒的抗体的检测线和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫。

上述一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条的制备方法，其特征在于先制备包被膜：将用包被缓冲液稀释的鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的单克隆抗体或抗鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的多克隆抗体和抗鼠IgG抗体稀释，并将三种抗体分别平行地喷于硝酸纤维膜的中部上，三种抗体渗入硝酸纤维膜后分别形成鸡传染性支气管炎病毒的检测线、鸡新城疫病毒的检测线和抗鼠IgG的控制线；再制备涂敷金标抗体的玻璃纤维膜；然后将包被膜粘贴在底衬上面的中部，在包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫，做成大板，切割即得胶体金试纸条。

上述一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条在检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒中的应用。

本发明利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基层自测等用的同时检测鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的试纸条，该试纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便，能广泛应用于现地农户、基层及个人对于鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的检测。

附图说明

附图为本发明试纸条的纵剖结构示意图。

具体实施方式

制备本发明的试纸条，所用的底衬1、样品垫2和吸水纸5是本领域通用的部件，其余部件的制备方法如下：

一、包被膜4的制备：

1.抗体的细胞株制备

①新城疫病毒的单克隆抗体细胞株的制备和检定

慢慢搅动含有新城疫病毒的鸡胚尿囊液，并加入氯化钠，使其终浓度为0.5mol/L，再加入10％(重量百分数，下同)的聚乙二醇6000(PEG6000)，4℃过夜，以8000r/min离心30分钟，收集病毒沉淀，将病毒沉淀用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解，4℃过夜，以10000r/min离心1小时，所得沉淀即为浓缩的病毒，储存在-20℃低温冰箱中备用。