[发明专利]小分子代谢产物的测试方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种代谢产物的测试方法，尤其涉及一种小分子代谢产物的测试方法。

背景技术

心血管疾病已成为许多国家的主要致死因素。在心血管疾病的发病过程中，血液、尿液或其它分泌物中的一些蛋白质、肽、糖类或其它小分子代谢产物浓度常发生显著改变。例如：D二聚体的出现意味着体内有小血栓形成，D二聚体的测定目前已广泛用于深静脉血栓和肺栓塞的排除诊断。小分子代谢产物，如血栓素B2，及其代谢产物2，3Dinor血栓素B2的变化也可与血栓形成性疾病相关。从而测定其在血液中或尿液中浓度可用于相关疾病的诊断、预后或药物治疗效果观察。目前，该类物质的常用测定方法是HPLC，即高压液相层析，此测定方法需要复杂的仪器。HPLC分析是一种基于分子量大小(分子筛)或离子性质(反相层析)的分析方法。由于HPLC不能分辨性质类似的物质，所以测定的特异性也较差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种测试准确的小分子代谢产物的测试方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：分子代谢产物的测试方法，包括如下步骤：

(1)、制备特异性抗体：由于小分子代谢产物分子量很小，所以抗原性很弱，所以单克隆抗体制备时需要连接一个截体，这个截体的连接便小分子物质的抗原大为提高；

(2)、将该单克隆抗体吸附到一个新疑的小颗粒上，这些小颗粒可以是乳胶或其他直径在0.01nm-50nm的圆球形物质；

(3)、样本处理：测定样本加入一些沉淀剂，如PEG等，离心去除沉淀，因为这些沉淀物有可能干扰PGI2的浓度测定；

(4)、将上述处理后的样本加入浓度汁进行浓度测定，根据在405nm或其他波长的读数决定被测物质PGI2的浓度。

本发明的优点是：

1、简便：不需要特殊仪器；

2、快速：能在4小时内取得结果；

3、特异性高：干扰性小于5％；

4、灵敏性高：灵敏度可达pg水平。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的详细说明。

(1)、将3mg纯化的血栓素B2溶解于100ul的乙醇，加而加入500ul的0.1PBS，再加入5mg白蛋白混匀，然而加入5mg EDC，5分钟后转入透析袋，用10升PBS透析。

(2)、将上述100ug等份注入兔或其它小动物内，14天后注入第二次，44天后注入第三次。60天后收集血液。

(3)、抗体纯化：抗体纯化是通过Protein A层析取得，将5ml左右血浆加入3ml左右ProteinA树脂，搅拌30分钟后离心收集上清。

(4)、特异性研究：特异性研究是通过一系统可能存在的干扰物质来实现的。

(5)、抗体偶联于微球将5ml抗体加入5ml微球悬液，并加入偶联剂，在4℃下混合至少10小时。

(6)、标准品和抗原制备：以血栓素不同浓度制备标准品，标准品浓度在10pg-1000pg之间。样品制备：10me血液或尿液没加入2g PEG离心去除沉淀。并收集上清。

(7)、将上述1ml标准品和1ml样品加入抗体偶联的微球，混合1小时后在405nm读数。根据标准推算样品含量。

上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明的限制，有关技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明精神和范围的情况下，还可以作出各种变化和变型，因此所有等同的技术方案也应属于本发明的保护范畴。