[发明专利]一种适于流式细胞分析的果树成熟叶片细胞核提取方法

权利要求书

1.一种适于流式细胞分析的果树成熟叶片细胞核提取方法，其特征在于，其所用的细胞核提取液组分为：

15-20mmol/L Tris，40-60mmol/L的KCl，10-20mmol/L的NaCl，2-5mmol/L的Na₂EDTA，10-20mmol/L MgSO₄，40-50mmol/L蔗糖和0.5-1.0％Triton X-100，体积加ddH₂O至200ml，调pH为7.5-8后，加入200μl的15mmol/L巯基乙醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞核提取方法中所用的染色缓冲液为在所述细胞核提取液内加入20mg/L的RNA酶A和20mg/L PI。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

1)先将果树成熟叶片用5-10％(V/V)次氯酸钠处理10-15分钟，再用预冷的乙醚处理30-50秒，并用所述细胞核提取液漂洗3-5次；

2)然后将步骤1)处理的果树成熟叶片与所述细胞核提取液进行研磨，400-600目筛网过滤，滤液在1-4℃下1500-2000rpm离心5-10分钟，用所述细胞核提取液漂洗3-5次，收集沉积细胞核；

3)用所述染色缓冲液进行悬浮，室温黑暗处放置，染色15-30min。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中每200mg叶片中加入1-2mL细胞核提取液。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤3)中每200mg叶片用400-600μl所述染色缓冲液进行悬浮。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于，所述细胞核提取过程均在冰上进行操作。