[发明专利]白介素-11半成品溶液的制备方法及其产品

说明书

技术领域

本发明涉及白介素-11制剂的制备方法，尤其涉及白介素-11半成品溶液的制备方法以及由该制备方法所制备得到的产品，属于白介素-11的制剂领域。

背景技术

人白介素-11是一种可直接刺激骨髓造血干细胞和巨核祖细胞增殖，诱导巨核祖细胞成熟分化，增加体内血小板生成，从而提高血液血小板计数，而血小板功能无明显改变的细胞因子。临床研究表明，使用该产品后发育成熟的巨核祖细胞在超微结构上完全正常，生成的血小板的形态、功能和寿命与天然生成的相一致。成熟人白细胞介素11由178个氨基酸组成，分子量为20KD，是强碱性蛋白(等电点为11.7)，同时该蛋白疏水性极强。

由于类似IL-11的细胞因子的自然来源十分有限，应用基因工程手段进行基因克隆、重组表达及改造，是目前众多细胞因子在基础研究和临床应用上的重要手段。基因工程的改造主要包括基因的缺失、突变和融合，从而可以制备出各种形式的衍生物。重组人白介素-11便是应用基因重组技术生产的一种促血小板生成因子。

白介素11蛋白性质的特殊性：由于白介素-11为强碱性蛋白，等电点为11.7，且疏水性极强，因此该蛋白药物在生产过程中对诸如离子强度、pH、温度、反复冻融和常规剪切力十分敏感。所述的剪切压力包括生产过程使用的加压泵或利用其它方法加压的管道输送，还有样品在包装和运输过程遇到的振荡等。其物理不稳定性表现为变性或者产生可溶性聚集和不可溶性的沉淀，而化学不稳定性表现为水解(尤其是其Asp¹³³和Pro¹³⁴氨基酸之间)、Asn⁴⁹位氨基酸的脱酰胺化及Met⁵⁸位氨基酸的氧化。因此白介素-11蛋白是一种性质十分特殊的细胞因子，必须对其生产过程的各个环节都小心处理并对制剂配方进行优化。

有鉴于白介素-11蛋白对所处环境的高度敏感性，所以国内外的成品生产都采用冻干粉针剂型。美国Genetics Institute公司rhIL-11产品于1997年获得最早获得FDA上市许可，其成品每支为5mg冻干粉，制剂配方中添加剂为甘氨酸，缓冲液为10mM的磷酸缓冲液(PB)，pH值为7.0，使用时用1.0ml无菌注射用水溶解。

由于白介素-11蛋白性质的特殊性，制剂配方采用pH值7.0时，尽管加入甘氨酸作为保护剂，但白介素-11的原液量取、pH的调节及搅拌和定容，会不同程度产生一些丝状沉淀或聚集体。它们或吸附到容器壁或悬浮于溶液中，造成配制好的半成品溶液不澄清透明，且有乳光产生。这种现象的产生造成两种不利的结果，一是因沉淀或聚集体的产生会影响成品的白介素-11浓度，使得最终产品的精确定量存在一定的不确定性；二是配制过程生成的聚集体或沉淀也为后续的无菌过滤带来困难，很容易造成滤膜堵塞。另外，在此pH值下的无菌过滤后的半成品分装也会因料液输送引入的剪切力造成主药蛋白的聚集或沉淀，使得冻干后的成品复溶后会絮状沉淀较多。临床应用上，乳光和微小沉淀导致临床起效慢、使用剂量大，另外医生在使用也必须加倍小心，不能用力振荡溶解及混匀，以避免产生更多的沉淀，给使用带来一定的困难。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有的白介素-11半成品溶液的制备所存在的白介素-11溶解度低、易产生沉淀和制剂乳光、活性不稳定等缺陷，提供一种新的白介素-11半成品溶液的制备方法，该制备方法克服了现有技术的缺陷，有利于促进白介素-11溶解，消除微小的丝状沉淀和制剂乳光，保持活性稳定，减少临床使用量。

一种白介素-11半成品溶液的制备方法，包括以下步骤：将白介素-11溶解于终浓度为10mM的磷酸缓冲液中(由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配制，pH7.0)，添加甘氨酸，搅拌，得到混合溶液，用稀碱或稀酸调节混合溶液的pH值；补加注射用水定容，搅拌混匀，即得；其中，采用稀碱将混合溶液的pH值调至为8.0-9.5，或者采用稀酸将混合溶液的pH值调为1.0-6.0；优选的，采用稀碱将混合溶液的pH值调至为8.0或9.5，或者采用稀酸将混合溶液的pH值调为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0或6.0；

更优选的，采用稀酸将混合溶液的pH值调为4.0、5.0或6.0；最优选的，采用稀酸将混合溶液的pH值调为5.0；其中，所述的稀碱优选为0.1mol/L的氢氧化钠，所述的稀酸优选为0.1mol/L的盐酸。