[发明专利]一种新的HLA-A2限制性表位多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物学和医学领域，更具体地涉及一种HLA-A2限制性表位多肽，以及该表位及其相关的重组蛋白、编码核苷酸序列、抗原递呈细胞、组合物在表达人磷脂酰乙醇胺结合蛋白(hPEBP4蛋白)肿瘤治疗及预防中的用途。

背景技术

人磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(human phosphatidylethanolamine(PE)-bindingprotein 4，hPEBP4)，其核苷酸序列和氨基酸可参见中国专利CN02136556.3。它是通过从正常成人骨髓细胞体外原代培养获得骨髓基质细胞(Bone marrowstromal cell，BMSC)并构建BMSC cDNA文库，利用cDNA文库大规模测序的手段，从BMSC cDNA文库中分离到的一种全长基因，属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)家族，在GenBank/EMBL数据库中登录(序列号为AY037148)。hPEBP4蛋白包含227个氨基酸，其氨基酸序列在75-195位为典型的磷脂酰乙醇胺结合保守区域(PBP)。

功能研究发现，hPEBP4能通过抑制Ras/Raf/MEK/ERK途径、JNK活化和PE外翻来抑制TNFα诱导的细胞凋亡，这些功能均由其PE结合保守区域(PBP)介导。hPEBP4表达下调后能够促进TNF-α诱导的乳腺癌细胞、前列腺癌细胞和卵巢癌细胞凋亡，提示hPEBP4很可能是治疗hPEBP4高表达肿瘤的一个新的作用靶点。

研究者通过组织芯片和免疫组化证实，在临床肿瘤标本中，hPEBP4蛋白高表达于50％以上的乳腺癌肿瘤组织中，而仅表达于4％的正常乳腺组织中。在人前列腺癌组织和卵巢癌组织中也发现hPEBP4蛋白的优势表达模式，提示hPEBP4很可能是一个相对特异性表达于肿瘤组织的肿瘤特异性/肿瘤相关抗原。

因此，如果以hPEBP4为靶标，对机体进行免疫，将会使机体产生针对hPEBP4蛋白的特异性免疫应答，从而使机体能有效地抑制、清除肿瘤细胞，为相关肿瘤的预防及治疗提供措施。

据此，本发明人前期已鉴定出来自hPEBP4的肿瘤抗原表位肽p40-48(TLFCQGLEV)(SEQ ID NO：1)，其氨基酸序列见中国专利申请CN200510030532.0。该表位肽在HLA-A2.1/K^b转基因鼠体内和HLA-A2.1阳性乳腺癌病人外周血中有较强的免疫原性，其诱导出的效应细胞能特异性杀伤表达hPEBP4⁺/HLA-A2.1⁺的肿瘤细胞。

细胞免疫在抗肿瘤和抗病毒免疫中起关键作用。T细胞识别的抗原是与细胞表面的MHC-I类或II类分子结合的肽，其长度约为8-12个氨基酸。而作为杀伤肿瘤细胞的主要效应细胞CTL(细胞毒T淋巴细胞，Cytotoxic TLymphocytes)则识别与MHC-I类分子结合的内源性肽。但是，许多能被CTL识别的天然肿瘤抗原肽的免疫原性都相对较弱。免疫原性的强弱与肽和MHC-I类分子亲和力的高低有关。在一定程度上，亲和力越高，其免疫原性越强。

为了增强肽的免疫原性，可对肽序列中的某些位点的氨基酸进行置换以改善、优化其与MHC-I类分子的亲和力。经过氨基酸置换后，应保持表位肽的抗原特异性(即对野生型肽的特异性识别能力)不改变，但增强其免疫原性(即诱导体内特异性CTL的杀伤能力)。氨基酸置换后的抗原肽已经被用于癌症病人，以改善了病人的抗肿瘤免疫应答。

然而，由于多肽氨基酸内部的微小变化就会对其结构和功能造成巨大的影响，甚至于使得多肽失去原有的活性(例如结合亲和力)，并且对多肽序列中氨基酸的修饰和改变方式和组合纷繁芜杂，要从众多修饰中筛选获得具有增强的活性(例如免疫活性)的修饰多肽并非易事。

因此，本领域中仍然迫切需要在已知表位多肽的序列的基础上开发出具有增强的免疫原性的修饰表位多肽。

发明内容

本发明的目的就是提供一种具有高免疫原性的合成肽及其应用。

在本发明的第一方面中，提供了一种HLA-A2限制性表位多肽，所述多肽具有诱导细胞毒T细胞杀伤活性，且所述的多肽具有YLWCQLLEV(SEQ IDNO：2)的序列。

在本发明的一个实施方式中，所述多肽的序列为YLWCQLLEV(SEQ IDNO：2)。

在本发明的第二方面中，提供一种重组蛋白，所述的重组蛋白含有如前所述的HLA-A2限制性表位多肽。

在一个优选例中，所述重组蛋白的序列如SEQ ID NO：2所示。