[发明专利]虎眼万年青总黄酮的制备方法及在抗肿瘤和抗炎止痛药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于医药领域，具体涉及从中药虎眼万年青中提取制备总黄酮的方法，虎眼万年青中提取制备总黄酮在治疗各种癌症和人体各系统、器官、组织各种炎性病变的抗炎镇痛及创伤，手术，骨折，癌症疼痛药物中的应用。

背景技术：

虎眼万年青(Omithogalum caudatum Ait)又名珍珠草、胡连万年青、海葱、葫芦兰，为百合科虎眼万年青属多年生草木植物。主要分布于东半球温带地区，原产于非洲南部，我国北方有栽培。该药味甘、微寒，归肝、脾经。具有清热解毒，消坚散结的功能。主要用于抗炎消毒，治疗肝病、肝癌、胆囊炎症等，具有极高的药用价值，民间用其全草或球茎入药。

据文献报道，该植物内含虎眼万年青皂苷，生物碱、黄酮、多糖、香豆素、苯甲酸、单糖、多种氨基酸，大量微量元素及低聚糖高级烷烃混合物等各类化学成分。其中虎眼万年青皂苷、生物碱、黄酮既是抗肿瘤的药效成分，又有较强的抗炎作用；其中的多糖组分能增强人体体液免疫和细胞免疫功能，与人参皂苷Rg1相近。

目前，抗炎镇痛药品种繁多，是临床应最多的一类药。而其中多数为化学药剂，虽然看炎镇痛作用明显，但可引起多种不良反应，具有较强的副作用。因此应用具有较强抗炎镇痛作用，而无毒副作用的虎眼万年青总黄酮为原料的中药制剂，为临床抗炎阵痛提供了一种新的选择。

癌症是危害人类健康的重大疾病之一，在各种类型的癌症当中以肺癌、胃癌、肝癌等发病率较高。而阐明内源性低分子抑瘤物的化学本质是这一领域研究的核心问题。首先，从植物中筛选出的活性化成分可作为化学治疗的补充，其次，小分子抑瘤物作用机理的研究有助于对肿瘤本质认识的深入及加强抗肿瘤活性物质筛选的针对性。

在采用现代药效学研究方法对虎眼万年青的有效成分进行筛选中，确定了具有抗肿瘤和抗炎止痛活性的有效部位我虎眼万年青总黄酮，以往虎眼万年青的活性成分制备方法多为有机溶剂直接冷浸、回流、超临界萃取等，尚未有对虎眼万年青中黄酮类有效成分有针对性制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供了一种虎眼万年青总黄酮的制备方法，克服现有的虎眼万年青活性成分提取方法总黄酮所占提取物成分比例低的不足。

本发明的另一个目的是提供虎眼万年青总黄酮的药用用途。

本发明的虎眼万年青总黄酮的制备方法包括以下步骤

(1)将虎眼万年青干燥粉碎；

(2)将步骤(1)得到的粗粉用浓度为浓度为10％-90％，乙醇或甲醇回流提取或浸渍提取或渗漉提取，合并提取液，减压浓缩；

(3)将步骤(2)得到的浓缩液加水沉淀后离心，上清液备用：

(4)将步骤(3)得到的上清液上大孔吸附树脂或聚酰胺柱；

(5)用水或稀乙醇洗脱步骤(4)大孔吸附树脂或聚酰胺柱，去杂后，用乙醇梯度洗脱，乙醇梯度洗脱范同为20％-80％。

(6)收集步骤(5)得到的乙醇洗脱液，减压，浓缩，干燥，粉碎后得到虎眼万年青总黄酮提取物。

虎眼万年青总黄酮的含量测定方法及其质量要求

采用紫外分光光度法，以NaNO₂-Al(NO)₃-NaOH显色测定总黄酮含量，以芦丁计，黄酮类化合物的总含量不低于50％。

以上提取方法得到的总黄酮主要用于制备抗肿瘤和抗炎止痛药物。

本发明的有益效果是：采用现代药效学研究方法对虎眼万年青的有效成分进行筛选，确定了具有抗肿瘤和抗炎止痛活性的有效部位，进而经过工艺研究确定了虎眼万年青总黄酮的制备方法。得到无毒副作用的虎眼万年青总黄酮为原料的中药制剂，为临床抗肿瘤和抗炎阵痛提供了一种新的选择。

本发明提取物的药效试验

1、虎眼万年青总黄酮对醋酸所致小鼠扭体的影响

用ICR小鼠50只，雄性，体重20-22g，按体重随机均分为5组，即：模型组，灌胃给予同体积蒸馏水；阳性药(阿司匹林)组，灌胃给予阿司匹林0.2g/kg；虎眼万年青总黄酮5g/kg、10g/kg、20g/kg，灌胃给药。各组给药容积均为0.2ml/10g。每天给药1次，连续5天。末次给药后1h，各组小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸0.1ml/10g，观察15min内小鼠的扭体次数，计算抑制率。

抑制率(％)＝(对照组小鼠平均扭体次数-给药组小鼠平均扭体次数)/对照组小鼠平均扭体次数×100％

实验结果采用组间t检验，比较各组间的差异，计算均数及标准差()。

镇痛实验结果