[发明专利]微波促进固相合成苦瓜MC-JJ0107多肽类似物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及MC-JJ0107多肽类似物及其微波促进固相合成方法。

背景技术

糖尿病是当今危害人类健康的重要疾病，目前全世界约有5％-7％的人受糖尿病困扰，被认为是继心脑血管疾病、恶性肿瘤之后，导致人类伤残、死亡的第三大杀手。

糖尿病分为I型和II型，I型糖尿病是一种自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰岛素。II型糖尿病占众多糖尿病患者总数的95％左右。II型糖尿病的原因是胰岛细胞代谢发生障碍，胰岛素分泌不足，或者产生胰岛素抵抗，是以胰岛素抵抗为主伴胰岛素分泌相对不足，或者以胰岛素分泌相对不足为主伴胰岛素抵抗导致的代谢性疾病。胰岛素分泌不足，或者产生胰岛素抵抗都可造成血液中葡萄糖过量，当血糖含量超过肾阈时，葡萄糖就转移到尿中排出，从而产生葡萄糖尿。

苦瓜(Momordica charantia)是一种人类有长期安全食用历史的蔬菜。近二十年来，人们在苦瓜的果实中发现了许多具有降血糖活性的成分，其中的多肽成分逐渐得到人们的认识并得到一些运用，但是由于苦瓜多肽的提取分离过于复杂，成本较高又难于得到纯的多肽，现在我们运用现代多肽合成技术能够解决这一问题。

多肽可以通过基因工程的方法或者化学合成的方法得到。基因工程的方法在获取长肽(氨基酸残基长度大于50)或蛋白质上比化学方法有优势，但是多肽的化学合成方法尤其是在固相合成策略出现后，在制备氨基酸残基长度小于40的多肽或小肽上有基因工程方法难以比拟的灵活性、多样性和高效性等。1963年Merrifield创立并开发了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有两种策略：即Boc/Bzl正交保护固相合成策略和Fmoc/tBu正交保护固相合成策略，Merrifield创立的固相合成法即为Boc/Bzl正交保护固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保护固相合成策略中存在一些缺点，如副反应多、条件苛刻以及在延长肽链的过程中多肽链会从固相上丢失等。而随后出现的Fmoc/tBu正交保护固相合成策略则反应条件温和的多。当近年来微波技术运用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技术产生了一个飞跃。微波促进化学反应是由于其使极性分子在微波场中快速旋转，使得一些反应速率较常规加热方法快10到1000倍，而且产率大大提高。1986年Gedye等人首次报道了将微波应用于有机合成中，微波可以促进许多化学反应，如Diels-Alder反应，皂化反应等，可以显著地加快反应速率并提高收率。在1992年，Hui-ming Yu等首先报道了将微波应用于多肽固相合成领域中，他们完成了酰基载体蛋白片断十肽(acyl carrier protein，ACP 65～74)的合成。

如何高效的合成长肽(大于20肽)在世界上仍然是一个挑战，因为多肽随着肽链的增加，其合成难度成倍增加。用传统的固相方法合成长肽，其收率往往很低杂质较多纯化困难，从而从实用的角度上说失去了合成的意义。其次合成周期长，在中间不出现困难肽序的情况下30肽一般需要近一个星期时间才能完成合成周期，如果出现困难肽序，往往就无法合成得到目标多肽。而使用微波促进固相合成多肽，可以克服困难肽序，合成传统固相方法无法得到的多肽，而且合成时间大大缩短，且显著提高多肽粗品纯度及收率，使得产品的纯化大大方便，只要经过一次制备型HPLC就能得到纯度较高的产品；此外还可以非常方便的用D型氨基酸及非天然氨基酸等对多肽进行定点修饰，去寻找活性更高、生物半衰期更长的多肽，这更是基因工程技术无法做到的。因此，我们在苦瓜降血糖(MC-JJ0107)多肽类似物的合成中采用此种方法快速高效的合成得到MC-JJ0107系列类似物。