[发明专利]一种II型胶原关节软骨修复液及其制备方法

权利要求书

1.一种II型胶原关节软骨修复液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)对哺乳动物关节软骨进行预处理：包括表面活性剂处理、氧化剂处理和消毒环节；

2)提取活性II型胶原原液：将所述步骤(1)得到的软骨经酸溶酶解、盐析、透析纯化的方式提取活性II型胶原原液；

3)将所述步骤(2)得到的原液与辅料、等渗溶液混合后，灌装于无菌无热源的一次性推注器中，得到一次性注射用II型胶原关节软骨修复液；

所述表面活性剂处理为采用体积百分数为0.1～5％的洗必泰处理10-60min；

所述氧化剂处理为采用体积百分数为0.1～3％的过氧乙酸处理5～20min；

所述消毒采用Co⁶⁰辐照消毒，剂量为3～10kGy；

所述酸溶酶解采用摩尔浓度为0.5～1M的醋酸溶解胃蛋白酶，使所述胃蛋白酶的质量百分数终浓度为1～2％后，将所述软骨在4℃下酶解12～48h；

所述盐析和透析步骤为：酸性盐析：在pH2.5～3.0下，用0.7MNaCl进行盐析，10000rpm离心20min，沉淀称重，用6～10倍体积的0.5M HAc溶解；中性盐析，将上述胶原液装在透析袋中，对0.2M NaCl+0.05M Tris pH7.5溶液透析，加入固体NaCl至终浓度4.0M，静置过夜，离心取沉淀,沉淀用0.5MHAc溶解后，对0.01MNa₂HPO₄充分透析后，离心，沉淀用0.5MHAc溶解，将上述的胶原液对0.2MNaCl+0.05MTris pH7.5透析，过DEAE-52柱，收集流出的胶原液，监测OD217nm吸光值。

2.如权利要求1所述的II型胶原关节软骨修复液的制备方法，其特征在于，所述辅料为硫酸软骨素或其钠、钾、钙、锌盐，透明质酸或其钠、钾、钙盐，海藻酸或其钠盐、氨基葡萄糖或硫酸化氨基葡萄糖或盐酸化氨基葡萄糖中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的II型胶原关节软骨修复液的制备方法，其特征在于，所述等渗液为pH7.2～7.4的磷酸盐缓冲液。

4.如权利要求1所述的II型胶原关节软骨修复液的制备方法，其特征在于，所述注射用II型胶原关节软骨修复液的组分为：100ml关节修复液中II型胶原含 量为1～500mg，其余为辅料和等渗溶液。

5.如权利要求4所述的II型胶原关节软骨修复液的制备方法，其特征在于，所述辅料含量为1～300mg。

6.一种按权利要求1-5之一所述的制备方法得到的II型胶原关节软骨修复液。