[发明专利]一种快速检测微生物的磁性荧光试剂盒及其制备方法和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测微生物的磁性荧光试剂盒及其制备方法和使用方法，具体涉及一种具有富集作用、可特异性、快速定量检测导致感染性疾病的微生物的磁性荧光试剂盒组成、制备及使用方法。

背景技术

微生物的快速检测方法是应用微生物学中一个迅速发展的领域，无论是对感染性疾病的控制和治疗，还是食品安全的监测和管理，都迫切需要快速的致病菌检测方法。

目前对致病菌决速检测主要采用微生物学、化学、生物化学、分子生物学、免疫学的方法对致病菌进行分离、检测、鉴定和计数。目前这些致病菌检测方法仍存在局限性，到目前为止，还没有一种方法能简便地从多种生物样本中分离富集致病菌；进而，适时的回答出以下两个问题：1、有没有特定的致病菌，如威胁食品安全的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，及严重威胁人类生命质量的结核分枝杆菌、肺炎链球菌(定性的检查)；2、如果有，有多少？(定量的检测)这对于确定致病菌及采用相应治疗方法至关重要。

免疫磁性分离方法，是将特异性抗体偶联在磁性颗粒表面，与样品中被检致病微生物发生特异性结合，载有致病微生物的磁性颗粒在外加磁场的作用下，向磁极方向聚集，并聚集在容器的内壁，稍后将标本液体移出，撒去磁场，收集磁性微球，可以将微生物从磁性微球上解离下来，这种方法可使致病微生物不但得以从多种样品，如土壤样品、食物样品、临床样本中得到分离，而且也得到浓缩富集。

免疫磁性分离技术从乳及乳制品、肉类和蔬菜中分离出沙门氏菌，其检测限为每克1×10²个细菌。Seo等将荧光免疫分析(FIA)与免疫磁性分离结合，测定接种于牛肉、苹果汁和生牛奶中的低浓度大肠杆菌，每克牛肉中仅有4个大肠杆菌即可被检出。可见将免疫磁性分离技术和其它检验方法，如酶联免疫吸附分析(ELISA)，多聚酶链式反应(PCR)，荧光免疫分析(FIA)，电子化学发光(ECL)相结合，可以数倍地提高分离效率和检测极限。而目前在微生物检测中，所有与免疫磁性分离相结合的鉴定和检测方法均包括后续生物化学、分子生物学、免疫学的检查方法，操作繁琐，设备条件要求高，应用前景不容乐观。

荧光微球是一种载有荧光分子的功能性微球，由于其在单个微球中富集了能够发射荧光的分子，在许多领域具有广泛的应用前景。目前结合特异性抗体的荧光微球已用于标记和识别各种抗原，包括多糖、蛋白质、细胞等。所检测的荧光强度则与待测物浓度线性相关，从而实现待测抗原的定性及定量检测。该方法最突出的优点是可以在同一体系中同时进行多标靶分析，特异性强，可实现快速诊断。

因此利用磁性纳米微球的富集作用和荧光微球的定性定量等现代纳米技术，结合现代生物检测方法寻找一种简单有效的方法快速富集各种微生物，并特异性、快速定性、定量检测微生物是本发明需要解决的主要内容。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种快速检测微生物的磁性荧光试剂盒，以解决现有微生物检测试剂盒所存在的诸多不足之处。该发明适用于医院诊断，食品卫生部门检验，或者科研机构研究使用。

本发明需要解决的技术问题之一是公开一种快速检测微生物的磁性荧光试剂盒。

本发明需要解决的技术问题之二是提供该磁性荧光试剂盒的制备方法。

本发明需要解决的技术问题之三是提供该磁性荧光试剂盒的使用方法。

本发明的原理，参见图1：

荧光微球由于微球的表面标有荧光物质或微球体内结构含有荧光物质的微球，受到外界能量刺激能激发出荧光。近年来，人们已经能够制备各种各样的粒径从纳米级到亚微米级的荧光微球。免疫荧光微球有比较稳定的形态结构及发光行为，受溶剂、热、电、磁等外界条件的影响比纯荧光化合物小很多。将荧光分子或发光材料通过高分子层或二氧化硅壳材料包裹或连接，表面再偶联靶向生物分子，则可形成具有靶向性的荧光纳米粒子；制备了荧光染料染色的纳米微球，通过特定的化学修饰，形成免疫磁性微球，可以使数千个荧光纳米粒子与一个微生物的表面抗原结合，这种放大效应的检测可实现对微生物的超高灵敏检测。