[发明专利]梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法

权利要求书

1.梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条，其特征在于设有载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgM抗体检测线、对照线和吸收垫；加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgM抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgM抗体检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体，在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。

2.如权利要求1所述的梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条，其特征在于所述载体板为PVC板。

3.如权利要求1所述的梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备梅毒重组抗原TPN17、TPN47

采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，得梅毒重组抗原TPN17和TPN47

2)硝酸纤维素膜的点样

在硝酸纤维素膜IgM检测线上包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体，在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗体，晾干；

3)制备胶体金

采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取1％氯金酸1mL加入到100mL去离子双蒸水中，得到的氯金酸浓度为0.01％，置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾，磁力加热搅拌下加入1％柠檬酸三钠水溶液2.0mL，继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止，冷却后置于棕色瓶中4℃冰箱保存备用；

4)胶体金与TPN17、TPN47的标记

胶体金与梅毒特异性抗原TPN17的标记：取胶体金10mL，用0.1mol/LNaOH调至pH5.4，加100μg TPN17，混匀，放置5min，加入5％BSA 1mL混匀，4℃、10000r/min离心1h，弃上清，将沉淀用TBS缓冲液溶解至10mL，4℃、10000r/min离心1h，弃上清，沉淀用TBS稀释至1mL，得胶体金标记的TPN17抗原；

胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作，得胶体金标记的TPN47抗原；

将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后，均匀地涂于玻璃纤维膜上，烘干，制备成胶体金垫；

5)制备免疫层析检测条

将加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgM抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgM抗体检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体，在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体，用切条机切成条状，得梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条。

4.如权利要求3所述的梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体的浓度为1～4mg/mL。

5.如权利要求3所述的梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体由抗TPN17-IgG抗体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1∶1混合，其终浓度为1～4mg/mL；三者点样量为1μL/cm。

6.如权利要求3所述的梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述柠檬酸三钠的浓度为2％。

7.如权利要求3所述的梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合，是胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1∶0.2～5混合。

8.如权利要求3所述的梅毒特异性IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述烘干的温度为37℃。