[发明专利]一种分离精子的方法及装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离精子的方法及装置。

背景技术

受精是精子与卵子结合在一起的过程，是一种重要的生命现象。哺乳动物的精子刚射出后不能与卵子结合，必须在雌性动物生殖管道停留一段时间后，或者在适当的培养液中培养一定时间后，才具有与卵子结合的能力，这个过程称为获能。获能是自然生殖的一个非常关键的环节。目前，获能机制尚未阐明，大多数资料是在体外用适当的培养液中培养精子所获得的。小鼠和大鼠是研究获能使用较多的动物，一般取小鼠或大鼠附睾尾部的精子进行获能机制研究。现在存在的问题有两个。1.从附睾尾部取精子时，附睾表面的小血管难以完全剔除，得到的精子溶液中总有部分血细胞。2.精子溶液中有少量死亡或运动能力很差的精子。血细胞、死亡的精子和运动能力很差的精子对精子获能机制的研究有一定影响。为了去除精子培养液中的血细胞、死亡的精子和运动能力很差的精子，一般采用上游法(swim up)，即将精子放置在离心管中37℃ 5％ CO₂培养一定时间，然后取上层培养液中的精子。用常规上游法处理精子后，有时上层培养液中仍存在部分血细胞，有运动能力精子的百分率一般在80-90％。

已公开的分离精子的发明装置还有“一种双管式浮游筛选精子管”(专利号200920019260.8)，包括两根立管，第一立管通过横管与第二立管联通，第一立管的下部侧壁上设置环形凸块，环形凸块的凸块侧壁与水平面的夹角是α，60度≤α≤85度，第一立管和第二立管的直径相等，都是D，横管的直径是d，2d＝D，此装置的制作比本发明装置复杂，不实用。为了获得高质量的精子，我们设计了一种简单实用的分离精子的装置，而且摸索出了分离效果很好的操作程序，获得的精子中有运动能力精子的百分率在95％左右，收集液中一般没有血细胞。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单、快速分离精子的方法及其装置，本发明所述的操作步骤皆以小量样品，适于在1.5ml离心管中操作。该法特别适合于小鼠和大鼠精子的筛选，为精子获能机制的研究提供高质量的精子。

一种分离精子的装置，所述的装置由1.5ml Eppendorff离心管、分离管和橡皮圈组成，所述的分离管处于离心管内部，且呈上下相通的漏斗形，其底部开口的内径为2mm，顶部开口的内径为6mm，分离管的长度为14-16mm；所述的橡皮圈缠绕于分离管的外壁上并与分离管底部的距离为分离管总长度的1/3-1/2，橡皮圈紧贴于离心管的内壁使所述的分离管的外壁以及底部和离心管的内壁均留有空隙。

使用上述的装置分离精子的方法，包括以下步骤：

(1)取0.2ml精子溶液放置在1.5ml的Eppendorff离心管底部；

(2)将分离管放在离心管中，分离管上的橡皮圈与离心管内壁贴紧；

(3)将培养液通过分离管加至离心管中，培养液液面高度高于分离管顶部1mm；

(4)轻轻盖住离心管盖，将离心管置于37℃ 5％CO₂培养箱中培养15min；

(5)用移液器将处于橡皮圈上部的分离管外壁与离心管之间的培养液转移至新离心管中，300g离心10min，弃上清，用培养液重悬精子，调节精子至所需浓度。

本分离装置由1.5ml Eppendorff离心管、分离管和橡皮圈组成，橡皮圈紧贴于离心管的内壁使所述的分离管的外壁以及底部和离心管的内壁均留有空隙。放置在离心管底部的精子只有进入分离管底部开口，向上穿过分离管，才能到达由分离管外壁、离心管内壁和橡皮圈围成的空隙。培养液液面高度只高于分离管顶部1mm，使得从分离管顶部开口进入空隙内的精子不易返回分离管内。分离管底部开口较小，内径为2mm，没有运动能力的精子不易进入分离管底部开口，分离管呈上下相通的漏斗形，漏斗形使得精子容易向上运动而不容易向下运动。本发明装置和方法操作简单，分离精子效果好，获得的精子中有运动能力精子的百分率在95％左右，比使用现有技术的装置和方法高出5-10％，而且收集液中一般没有血细胞。

附图说明

图1为本发明的装置示意图；

图中1为离心管；2为分离管，3为橡皮圈。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明，而非限制本发明。

实施例1