[发明专利]酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺。

背景技术

山豆根多糖(Sophora subprosrate polysaccharide)作为猪的疫苗免疫增强剂，可显著提高疫苗的保护率和抗病力，应用前景广阔。然而，目前分离提取山豆根多糖的水提醇沉法存在多糖得率低和总糖含量低的问题，以致于生产效率低、供应不足，难以满足市场需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种粗多糖得率高和总糖含量高的酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺。

为解决上述技术问题采用如下技术方案：A)准确称取粉碎的山豆根，按质量体积比1∶15加入蒸馏水，浸泡0.5h；B)调节步骤A)中浸泡液的pH至5.0～7.0，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为1％～4％，充分混匀后，置于50℃～60℃的水浴中反应120min～180min，过滤，滤液备用，残渣按质量体积比1∶15加入蒸馏水，置沸水中水浴，过滤，滤液备用；C)合并步骤B)中两次滤液，将滤液蒸馏浓缩，加入体积5倍于浓缩液的95％乙醇使醇浓度达80％，充分混匀后，低温静置过夜，倾出上清液，离心得沉淀；D)取步骤C)中沉淀按质量体积比1∶5加蒸馏水溶解，静置，离心，倾出上清液备用；E)取步骤D)中上清液，加入体积5倍于上清液的95％乙醇沉淀，低温静置过夜，离心，沉淀部分加入95％乙醇搅拌，离心除去乙醇得山豆根粗多糖湿品；F)将步骤E)中山豆根粗多糖湿品冷冻干燥，得山豆根粗多糖干品。

本发明的酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺的粗多糖得率和总糖含量明显高于目前的水提醇沉法，应用于生产山豆根多糖可提高效率、满足市场需求。

具体实施方式

以下为用本发明的酶解法分离提取山豆根多糖的实施例：

实施例1

A)准确称取粉碎的山豆根4g，加入蒸馏水60mL，浸泡0.5h；B)调节步骤A)中浸泡液的pH至5.0，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为4％，充分混匀后，置于60℃的水浴中反应150min，过滤，滤液备用；残渣加入60mL蒸馏水，置沸水中水浴，过滤，滤液备用；C)合并步骤B)中两次滤液，将滤液蒸馏浓缩，加入体积5倍于浓缩液的95％乙醇使醇浓度达80％，充分混匀后，低温静置过夜12h以上，倾出上清液，3000r/min离心10min得沉淀；D)取步骤C)中沉淀按质量体积比1∶5加蒸馏水溶解，静置，3000r/min离心10min，倾出上清液备用；E)取步骤D)中上清液，加入5倍量的95％乙醇沉淀，低温静置过夜12h以上，3000r/min离心10min，沉淀部分加入95％乙醇搅拌，离心除去乙醇得山豆根粗多糖湿品；F)将步骤E)中山豆根粗多糖湿品在-20℃冰箱中冷冻12h以上至冻硬，然后放入冷冻干燥机中冻干，即得山豆根粗多糖干品。

实施例2

其他条件同实施例1，pH为6，木瓜蛋白酶质量体积浓度为1％，水浴温度为55℃，水浴时间为150min。

实施例3

其他条件同实施例1，pH为7，木瓜蛋白酶质量体积浓度为2％，水浴温度为50℃，水浴时间为150min。

实施例4

其他条件同实施例1，pH为7，木瓜蛋白酶质量体积浓度为4％，水浴温度为55℃，水浴时间为120min。

实施例5

其他条件同实施例1，pH为5，木瓜蛋白酶质量体积浓度为2％，水浴温度为55℃，水浴时间为180min。

以下为用常规的水提醇沉法分离提取山豆根多糖的生产工艺的对照例：