[发明专利]幽门螺杆菌尿素酶B抗原表位多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶B亚单位(UreB)蛋白B细胞抗原表位多肽及其应用。

背景技术

1982年澳大利亚学者Warren和Marshall首次从慢性活动性胃炎病人胃黏膜中分离并培养出幽门螺杆菌(Helicabucter pylori，H.pylori)，该菌的发现揭开了胃微生物研究的新时代。幽门螺杆菌分布极为广泛，世界范围内人群感染率高达50％左右。业已证实，幽门螺杆菌感染是慢性慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡的主要病因，幽门螺杆菌的持续性感染还与胃腺癌(gastric adenocarcinoma)和胃淋巴瘤(gastric lymphoma)的发生密切相关。1994年，世界卫生组织将它定为I类致癌因子(Type I carcinogen)。

现在针对幽门螺杆菌感染的治疗主要是采用两种抗生素联合质子泵抑制剂，然而，这一治疗手段有着诸多缺点，如花费过高，患者依从性差和产生药物抗性菌株的高风险性等，尤其是抗生素治疗不能防止再度感染。所以，现普遍认为疫苗是在全球范围内控制幽门螺杆菌感染的最有效的方法。早期的幽门螺杆菌疫苗研究大多应用幽门螺杆菌全菌成分，存在着效果差、不易标准化等缺点。目前幽门螺杆菌疫苗抗原的研究集中在幽门螺杆菌中具有免疫保护作用的抗原上。目前在小鼠模型上已证实多种幽门螺杆菌抗原，包括空泡毒素(VacA)、细胞毒素相关蛋白(CagA)、热休克蛋白A和B(HspA和HspB)、尿素酶和过氧化氢酶等。其中尿素酶蛋白被视为最有前途的幽门螺杆菌疫苗候选，是研究最多的一个。尿素酶不仅对幽门螺杆菌在胃内酸性环境下定植提供保护作用，而且是幽门螺杆菌中的一种保守蛋白，不同菌株间的保守性达98％以上。已有大量动物实验证明了它作为疫苗抗原的安全性和有效性。尿素酶包括尿素酶A(UreA)和B(UreB)两个结构亚单位，其中UreB是尿素酶的主要功能单位，含有尿素酶的活性位点，其保护性优于UreA。

疫苗是控制感染性疾病最为经济有效的办法，疫苗接种能够刺激机体产生不同于自然感染导致的特异性免疫应答，可以达到预防或者治疗幽门螺杆菌感染的目的。目前尿素酶疫苗预防幽门螺杆菌感染已在许多动物模型上获得成功，国外多个研究组报告口服幽门螺杆菌尿素酶能防止小鼠感染猫螺杆菌。迄今为止，国内外对幽门螺杆菌疫苗的研究主要是采用模拟自然抗原的方法进行蛋白疫苗的研制，单独表达某个抗原分子或融合表达几个抗原分子，亦或将抗原分子与粘膜免疫佐剂融合表达，可部分获得一定时期内的免疫保护作用。目前，表位疫苗已成为研制感染性疾病和恶性肿瘤疫苗的方向，且已在HIV、疟疾、乙肝病毒、肿瘤等方面表现出独特的优势。鉴于此，在表位水平上进行选择和重组来设计疫苗，可能会是一种有效的预防和治疗幽门螺杆菌感染的疫苗形式。利用幽门螺杆菌保护性抗原的表位来设计疫苗，通过单个或串连表达保护性抗原上的特异性表位，并辅以能有效诱发黏膜免疫的佐剂来激发机本更强、更特异的、不同于自然感染时的免疫应答，有可能打破免疫耐受，从而可以达到预防或治疗幽门螺杆菌感染的目的。

已经有大量实验表明，尿素酶B亚单位(UreB)不仅对幽门螺杆菌感染具有预防作用，而且还可以在一定程度上清除体内已经感染的幽门螺杆菌。研究发现针对UreB不同表位的单抗可以抑制尿素酶的活性，从而阻断幽门螺杆菌的感染，但用完整的尿素酶免疫动物并不能很好的抑制尿素酶的活性，因而不能完全阻止幽门螺杆菌在胃内的定植。

发明内容

本发明的目的是提供一种幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶B亚单位(UreB)蛋白B细胞抗原表位多肽及其应用。

本发明提供的幽门螺杆菌尿素酶B亚单位中和性B细胞抗原表位多肽，来源于幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)，名称为UP38，，是如下1)或2)的多肽：

1)由序列表中序列37所示的氨基酸序列组成的多肽；

2)将序列表中序列37的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有幽门螺杆菌尿素酶抗原表位功能的由1)衍生的多肽。

序列表中序列37由15个氨基酸残基组成，来源于幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)上第181-195位氨基酸残基。

所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加可为1-10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加；所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加可发生在上述结构域之外。

上述表位多肽的编码基因也属于本发明的保护范围，，所述编码基因为1)、2)、3)或4)：