[发明专利]一株苏云金芽孢杆菌的分离纯化及其驯化方法与用途

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种存在于污泥中的微生物的提取方法和用途，具体地说是一株存在于噁草酮废水处理池污泥中的苏云金芽孢杆菌的分离纯化及驯化方法与用途。

二、背景技术

据有关部门调查，我国2008年用水量为8000亿吨，其中工业用水约占全国总用水量的25.4％，我国人均占有水资源仅有2410吨。随着生产的发展，水资源短缺带来的压力及制约越来越严重。有数据表明，全国七万余家企业中，工业废水年排放量稳中有升，已达250亿吨，占废水总排放量的51％，COD排放量约620万吨，农药行业在化学工业中是污染大户，也是治理污染难度最大、投资最多的行业。

农药生产废水主要来自于合成反应中的生成水以及设备和车间地面冲洗水、产品精制洗涤水。其生产废水往往有以下特点：①有机物含量很高，毒性大，合成废水的COD浓度一般为6000-90000mg/L，有的甚至高达几十万mg/L；②污染物成分较复杂，农药废水中含有各种农药中间体、磷、硫化物和盐类。多数农药有杀菌作用，能抑制微生物代谢活动，使生物系统紊乱；③生物难降解的物质较多，有些农药分子是芳香族化合物或卤代芳烃及有机硫磷化合物，这些都属于难生物降解物质；④产品排放的废水量很大，加之生产管理与操作水平的限制，使废水的水质、水量常有变化和波动，从而给废水处理带来难度。农药有机废水的排放，直接造成总磷、氨、氮等超标，进而使水体富营养化，藻类植物的大量繁殖，另外有些高含毒农药及酚、氰等化合物的废水排放，对水体中各种植物造成了极大的危害，同时对地下水及地表水造成污染，严重破坏环境，影响人类生存。

目前，农药废水的处理技术概括可分为生化法、物化法和化学法等。

农药废水生化处理的原理是通过微生物自身的氧化还原等作用将吸收的一部分有机物分解为简单的无机物的同时得到微生物生长、活动所需的能量，而另一部分有机物则转为生物体所需的营养质，组成新的原生质或细胞物质，使微生物生长、繁殖。废水中的可溶有机物可直接通过细胞壁被微生物吸收，而固态或胶态的附于细胞壁的不溶有机物则为微生物分泌的酶分解之后而吸收。

生化处理所用的微生物有好氧和厌氧两种。好氧微生物在氧气的存在下，能将有毒有机物分解为二氧化碳、水、硝酸盐、盐酸盐、磷酸盐等稳定、无臭物质。厌氧微生物在无氧条件下才能将有毒有机物分解为甲烷、二氧化碳、氨、硫化氢等物质。生化处理的关键在于保证微生物生长与繁殖的条件。废水中应保持足够的溶氧量；酸碱度应控制在pH9-11，温度控制在15-50℃，以18-40℃为佳；废水应控制一定比例的碳、氮、磷含量和一定量的养料如生活污水、硫铵等，以保持微生物生长繁殖必需的养料。生化处理过程与设备亦应适应微生物生长、繁殖的需要。

农药废水的一个很主要的特点就是含盐份高，这也就制约了此类废水的高效治理。高盐度有机废水是指含盐总量(包括Na⁺、Ca²⁺、SO₄^2-、Cl^-等)不低于1％的废水，其来自于工业方面所包含的行业有：印染、化工、制药、造纸、农药等。高盐度有机废水除盐度高外，有机物含量也很高，如不经处理直接排放，会给环境带来极大的污染和破坏，进而威胁到人类的生命健康。

三、发明内容

本发明的第一个目的是提供一株耐高盐、高效降解含氯仿、甲苯等芳香族化合物难降解有机污染物废水的苏云金芽孢杆菌菌株。

本发明的第二个目的是提供苏云金芽孢杆菌菌株(Bacillus thuringiensis)ODPY分离纯化与培养方法。

本发明的第三个目的是提供苏云金芽孢杆菌在废水的生物治理中的应用。

苏云金芽孢杆菌菌株(Bacillus thuringiensis)ODPY，属革兰氏阳性杆菌，属于芽孢杆菌属，其菌体为杆状，兼性厌氧，有鞭毛，有芽孢，有较高的耐盐度，在牛肉膏蛋白胨固体培养基上生长迅速。

本发明的技术方案如下：

1、自生产农药恶草酮废水处理池的污泥中分离出苏云金芽孢杆菌菌株(Bacillusthuringiensis)ODPY

A、在无菌条件下，将生产农药恶草酮废水处理池的污泥加水混匀后静止0.5～2h，取上层清液1mL，用0.8％的生理盐水梯度稀释10^-1～10^-8，得到8份稀释菌液；

B、在无菌工作台上，取8个平板，向每个平板注入融化后降温至约40～50℃的分离纯化固体培养基15～20mL，待凝固；