[发明专利]修饰糖、其缀合物及其制备方法

说明书

本申请是国际申请PCT/IB2003/004194，国际申请日2003年9月1日，中国国家阶段申请号03823724.5，名称“修饰糖、其缀合物及其制备方法”的发明专利申请的分案申请。

本文对所引用的文献进行了全面的参考。

技术领域

本发明涉及糖化学领域，是关于修饰糖、其制备方法以及缀合衍生物。具体地说，本发明涉及含有接头部分的修饰糖，所述接头用于连接糖与蛋白质。

背景技术

多糖是重要的生物分子，它们广泛用于制药，用于预防和治疗疾病。例如，荚膜多糖多年来被用于抗荚膜细菌如脑膜炎球菌(脑膜炎奈瑟氏球菌)、肺炎球菌(肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae))和Hib(流感嗜血杆菌B型(Hacmophilus influenzae type B))的疫苗，。

为增强这些多糖的免疫原性，特别是在儿童中的免疫原性，开发出了缀合物疫苗。其中，荚膜多糖与载体蛋白缀合[例如美国专利4,711,779、4,761,283和4,882,317]。缀合分子中，多糖与蛋白质可以直接相连，也可以通过接头连接。

尽管已经开发出了多种不同类型的接头，但仍然需要多功能的，以简单、可靠的化学作用即可与多糖和蛋白质偶联的新型接头。而且，还需要无毒的，无需强酸强碱之类苛性试剂在温和条件下即可形成的新型接头。

发明内容

本发明的修饰糖

发明所提供修饰糖包含结构式(I)所示的组成部分：

-A-N(R¹)-L-M(I)

其中：A是键，-C(O)-或-OC(O)-；

R¹选自H或C₁-C₆烃基；

L是C₁-C₁₂亚烃基；

M是掩蔽醛基。

“修饰的荚膜糖”指由天然荚膜糖经适当修饰而获得的糖。因此，本发明的修饰荚膜糖保留了天然荚膜糖中基本的单糖单元重复序列。

“糖”包括寡糖(例如含2-39个单糖单元)和多糖(例如含40个或更多单糖单元)。细菌中的天然荚膜糖一般为多糖。多糖将处理可产生较短的寡糖。获得寡糖可通过对天然多糖进行纯化和/或分级(例如弱酸水解、加热、大小排阻层析等)。

通常，本发明的修饰糖是寡糖。寡糖可用上述任一种分级方法由多糖获得。

本发明的修饰荚膜糖可由天然荚膜糖获得。然而，本发明不限于得自天然荚膜糖的修饰糖。本发明修饰荚膜糖还可用其它方法获得，如全合成或部分合成。

在本发明的修饰荚膜糖中，结构式(I)部分可由荚膜糖的非末端羟基形成，或由荚膜糖的末端异构羟基形成。

当结构式(I)部分由末端异构羟基形成时，较好的是，它通过例如还原氨基化反应取代末端异构羟基。糖末端羟基上的还原氨基化反应是本领域熟知的。

当结构式(I)部分由非末端羟基形成时，较好的是，它经例如氨基甲酸酯基团与非末端羟基相连。因此，实施方式之一中，本发明的修饰荚膜糖包括结构式(Ia)所示的组成部分：

-OC(O)N(R¹)-L-M    (Ia)

其中R¹、L和M如前所述。

制备这种化合物可通过：对糖上的游离羟基进行例如CDI衍生，随后将该氨基甲酸酯中间体与结构式HN(R¹)-L-M所示的胺反应。

R¹优选H。L优选C₁-C₁₂亚烃基，-CH₂CH₂CH₂-更好。当结构式(I)所示组成部分用于将糖与蛋白质连接成糖-蛋白缀合物时，L基团的作用是间隔基。据信，糖和蛋白质之间的间隔基可提高缀合物的稳定性。

本领域技术人员知道许多不同的易转变成醛基的官能团。此类官能团都适合作为掩蔽醛基M。掩蔽醛基M优选：

其中：R²选自H、C₁-C₁₂烃基、C₃-C₁₂环烃基、C₅-C₁₂芳基或C_5-12芳基-C_1-6烃基(R²不宜为H)；

X和Y相同或不同，各自选自O或S；