[发明专利]透脑屏障防治老年性痴呆的融合多肽

说明书

技术领域

发明属于生物医药技术领域，具体涉及能穿过血脑屏障、防治老年性痴呆的神经营养因子多肽类药物。

老年性痴呆是最常见的神经退行性病，严重威胁人类健康的疾病，其病理学特征是大量神经元内形成以过度磷酸化的微管相关蛋白tau为主要成分的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)及由β-淀粉样多肽(β-amyloid，Aβ)沉积与神经元外形成的大量老年斑(senile plaques，SP)，同时伴有胆碱能神经元数量、神经元突触数量的大量减少，临床上表现为进行性认知功能表减退。

目前尚没有针对老年性痴呆病理特征的治疗药物和方法。美国FDA通过治疗老年性痴呆的药物主要有乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂和NMDA受体拮抗剂两类，这两类药物仅对中晚期老年性痴呆患者的痴呆症状有所轻度改善或延缓痴呆进展。因此研发新的针对老年性痴呆病理学特征的药物，成为全球的期待。

大量研究资料已证实神经营养因子具有神经保护、防治老年性痴呆的作用。如神经生长因子(NGF)是研究得最早、最多的一种神经营养因子。神经元存活、生长、迁移、分化，神经元与其它神经元建立功能性、结构性联系，神经元损伤后修复与再生，神经元退行性变性等过程均受到NGF的影响。NGF是典型的靶向性神经营养因子，能促进神经元分化、维持神经元的生长和功能、促进损伤后修复。给老年性痴呆模型大鼠脑内注射NGF，阻止了90-100％的胆碱能神经元的丢失，并改善了大鼠的学习记忆能力。

目前，神经营养因子已作为外周神经损伤治疗药物在临床使用，作为蛋白类药物，由于其分子量大不能通过血脑屏障大大限制了其临床应用价值，尽管有报道采用脑室穿刺给药，但这种方法因操作复杂且容易感染不被广泛应用。因此，突破血脑屏障并定向作用于神经元将使神经营养因子在脑内发挥其完美的生物学效应。

如何让药物进入中枢，是制约中枢药物研发的瓶颈。神经营养因子最有可能通过特异性载体进入中枢。目前已知的载体存在着明显的局限性和缺点。如：TFR缺乏中枢定向性并可引起免疫反应；OX26/8D3易导致免疫反应；M6P受体只在哺乳动物幼年才有表达；RAP易被体内清除机制清除。2007年科学家发现了一种多肽(29肽)可携带治疗性的小干扰RNA穿过血脑屏障到达神经细胞；而且多次治疗不会引起免疫反应、产生肽的抗体；29肽可在血液中稳定存在8小时以上。

发明内容

本发明的任务是提供一种融合多肽，使其具有透脑屏障防治老年性痴呆的功能。

实现本发明的技术方案是：

本发明提供的这种融合多肽，由神经营养因子活性肽段和29肽，以及位于神经营养因子活性肽段和29肽中间的连接肽构成。所述的29肽的氨基酸序列为YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG；所述的连接肽的氨基酸序列为AGT；所述的神经营养因子活性肽段可以是以下所述神经营养因子中的一种：

(1)脑源性神经营养因子(BDNF)DPAKR或PAAKR；

(2)神经生长因子(NGF)KGKE或TDEKQ；

(3)睫状神经营养因子(CNTF)LFEKKL。

所述的神经营养因子活性肽段可来源于鼠、人或重组合成。

制备本发明融合多肽的制备可以直接化学合成，也可以采用以下方法制备：构建神经营养因子活性肽段-连接肽(AGT)-29肽(YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG)融合基因的大肠杆菌表达载体以及神经营养因子-29肽(YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG)融合基因的大肠杆菌定向多拷贝表达载体，在大肠杆菌中表达后纯化。

本发明提供的融合多肽利用29肽穿透血脑屏障的优势，使神经营养因子在中枢神经元富集并发挥对老年性痴呆的防治作用。所构建的融合多肽保留了神经营养因子的生物学活性，能穿透血脑屏障直接作用于脑发挥防治作用本发明融合多肽能通过外周静脉注射的方式给药，多次治疗不会引起免疫反应、不会产生肽的抗体。

本发明融合多肽可按以下方法制备：

1.构建神经营养因子活性肽段-连接肽(AGT)-29肽(YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG)融合基因的大肠杆菌表达载体以及神经营养因子-连接肽(AGT)-29肽(YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG)融合基因的大肠杆菌定向多拷贝表达载体，在大肠杆菌中表达、纯化。

2.直接化学合成神经营养因子活性肽段-连接肽(AGT)-29肽(YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG)融合多肽。