[发明专利]高速逆流色谱制备特女贞苷、女贞苦苷和齐墩果酸的方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然植物提取制备领域，涉及一种从天然植物女贞子中用高速逆流色谱分离制备特女贞苷、女贞苦苷和齐墩果酸的方法。

背景技术：

女贞子为木犀科(Oleaceae)植物女贞Ligustrum lucidum Ait干燥成熟果实，是我国传统的扶正固本药物。具有有养阴气、平肝火、健腰膝、壮筋骨、滋补肝肾、乌须发等功效。近年来多用于治疗慢性气管炎、肝炎、高血脂症、糖尿病、更年期综合征、不孕症、动脉粥样硬化等。所含化学成分主要有有机酸、苷、萜类、甾类、糖类、氨基酸及微量元素、挥发油。齐墩果酸为其主要五环三萜成分，特女贞苷和女贞苦苷是其水溶性裂环环烯醚萜苷成分。结构如下：

           特女贞苷                           女贞苦苷               齐墩果酸

现代药理研究表明，女贞子具有强心、激素双向调节、降血糖降血脂、调节机体免疫功能、抗炎抗菌、抗衰老、抗动脉粥样硬化、能对化疗或放疗所致白细胞减少由升高白细胞的作用。特女贞苷具有协同增加亚适量的ConA刺激淋巴细胞转化的作用，并在一定程度上有拮抗Dex的抑制作用。齐墩果酸具有护肝降酶、抗血小板聚集、降血脂、对免疫系统及对II、III、IV型变态反应具有明显抑制作用。为了对女贞子三萜及裂环环烯醚萜苷成分进行更深入的药理活性与作用机制等研究，同时需要三萜及裂环环烯醚萜等指标性成分对女贞类药材和相关中药制剂进行质量控制，需要大量单体化合物。因此，提供一种快速、高效的从女贞中分离纯化特女贞苷、女贞苦苷和齐墩果酸方法，对开发具有特殊疗效的现代中药制剂和充分利用我国药材资源等具有重要意义。

采用普通色谱柱法、重结晶等传统的分离方法分离植物中的有效单体，不仅费时费力、污染环境，且所用固定相对样品有不可逆性吸附作用，这就需要一种新型的分离技术来解决上述问题。高速逆流色谱(HSCCC)是近年来发展起来的一种连续的无需固体支撑物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

发明内容：

本发明的目的是提供高速逆流色谱制备特女贞苷、女贞苦苷和齐墩果酸的方法，以克服现有技术中存在的上述问题。

本发明通过以下技术方案实现：

高速逆流色谱制备特女贞苷、女贞苦苷和齐墩果酸的方法，其包括以下步骤：

由粗提物的制备和粗提物的分离纯化两部分组成，其特征在于粗提物的分离纯化应用高速逆流色谱，其基本工艺路线是：

(1)将女贞子药材粉碎，沸水水浴加热提取，提取液趁热过滤，冷却，得到水取物和残留物；

(2)特女贞苷、女贞苦苷的富集：将水提物加入大孔吸附树脂吸附，10-50％乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到特女贞苷、女贞苦苷混合粗提物；

(3)齐墩果酸的提取：将水提残留物加入沸乙醇中回流提取1-1.5小时，提取1-3次，过滤得提取液，再加入活性炭回流脱色，过滤，浓缩脱色液得齐墩果酸流浸膏；

(4)特女贞苷、女贞苦苷的纯化：将粗提物用高速逆流色谱分离法制得高纯度特女贞苷和女贞苦苷的纯品。

(5)齐墩果酸的纯化：将上述齐墩果酸流浸膏用高速逆流色谱分离法制得高纯度齐墩果酸纯品。

步骤(1)中所述的水提液料比为1∶8-10(kg/L)，提取时间为1.5-2小时。

步骤(2)中所述大孔吸附树脂可选非极性、弱极性或中极性大孔吸附树脂，如D101、AB-8、DM301、HPD100等大孔吸附树脂。

步骤(2)中所述洗脱条件为先用3-4倍柱体积10％-30％乙醇洗脱，再用4-5倍柱体积35％-50％乙醇洗脱。

步骤(3)中所述沸乙醇浓度为70％-95％，用量为残留物质量的10-20倍；所述活性炭用量为0.5％-1％，脱色0.5-1小时。

步骤(4)(5)中所述高速逆流色谱法对粗提物进行纯化，先配制构成固定相、流动相的溶剂体系，使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使柱子转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进入制备好的粗提物，两相溶剂体系以上相为固定相，下相为流动相，根据检测谱图接收目标成份。