[发明专利]基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统

权利要求书

1.一种用于检测待测蛋白是否相互作用的融合蛋白组，为如下1)和2)：

1)由荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号组成的融合蛋白；

2)由荧光蛋白B、待测蛋白B和核定位信号组成的融合蛋白；

所述荧光蛋白A与所述荧光蛋白B为发不同颜色荧光的荧光蛋白；

所述1)所示融合蛋白与2)所示融合蛋白分别独立包装；

所述待测蛋白A和待测蛋白B是待检测是否相互作用的两个蛋白。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白组，其特征在于：所述1)所示融合蛋白中，荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号顺次连接；

所述2)所示融合蛋白中，待测蛋白B、核定位信号和荧光蛋白B顺次连接。

3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白组，其特征在于：所述荧光蛋白A为红色荧光蛋白或绿色荧光蛋白；所述荧光蛋白B为红色荧光蛋白或绿色荧光蛋白。

4.根据权利要求1-3中任一所述的融合蛋白组，其特征在于：所述绿色荧光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述红色荧光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述核输出信号的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述核定位信号的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

5.权利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的编码基因；权利要求1-4中任一所述2)所示融合蛋白的编码基因。

6.如下Ⅰ、Ⅱ或Ⅲ所示的重组表达载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒：

Ⅰ、含有权利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的编码基因的重组表达载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒；

Ⅱ、含有权利要求1-4中任一所述2)所示融合蛋白的编码基因的重组表达载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒；

Ⅲ、含有权利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的编码基因和权利要求1-4中任一所述2)所示融合蛋白的编码基因的重组表达载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒。

7.根据权利要求6所述的重组表达载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒，其特征在于：

所述Ⅰ中所述重组表达载体为如下a所示；

所述Ⅱ中所述重组表达载体为如下b所示；

所述Ⅲ中所述转基因细胞系是将a所示重组表达载体和b所示重组表达载体转入宿主细胞得到的；

a、按照如下方法得到的重组表达载体：在载体pmWasabi-C的多克隆位点间插入所述核输出信号的编码基因和待测蛋白A的编码基因，使绿色荧光蛋白的编码基因、待测蛋白A的编码基因和核输出信号的编码基因顺次连接为融合基因；

b、按照如下方法得到的重组表达载体：在载体pDsRed1-N1的多克隆位点间插入所述核定位信号的编码基因和待测蛋白B的编码基因，使待测蛋白B的编码基因、核定位信号的编码基因和红色荧光蛋白的编码基因顺次连接为融合基因。

8.根据权利要求7所述的转基因细胞系，其特征在于：所述宿主细胞为Hela细胞系。

9.如下物质中的至少一种在检测蛋白是否相互作用中的应用：1)权利要求1-4中任一所述的融合蛋白组，2)权利要求5所述编码基因，3)权利要求6-8中Ⅲ所述重组表达载体，4)权利要求6-8中Ⅲ所述重组菌，5)权利要求6-8中Ⅲ所述转基因细胞系。

10.一种检测蛋白是否相互作用的方法，包括如下步骤：检测权利要求6-8中Ⅲ所述转基因细胞系的荧光发光情况，根据检测结果判别待测蛋白是否相互作用；

所述根据检测结果判别待测蛋白是否相互作用的方法如下：

若所述转基因细胞系中细胞核中同时具有两种颜色荧光，则所述待测蛋白相互作用，

若所述转基因细胞系中细胞核中具有一种颜色荧光，而细胞质中具有另一个种颜色荧光，则所述待测蛋白不能相互作用。