[发明专利]愈创木烷型倍半萜的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种从植物大叶盘果菊中分离得到的一个愈创木烷型倍半萜类化合物：15-羟基-2-氧-愈创木-3-烯-1α，5α，6β，7α，10α，11β氢-12，6-内酯(15-hydroxy-2-oxo-guaia-3-eh-1α，5α，6β，7α，10α，11βH-12，6-olide，化合物1)的制备方法和应用。

背景技术

大叶盘果菊(Prenanthes macrophylla Franch.)为菊科(Compositae)盘果菊属(Prenanthes)植物，是中国的特有植物。本属植物全世界约40种，主要分布于热带和温带地区，我国约有16种，其中1种可做药用，有治痈疮肿毒，活血止血的功效。目前对该属植物化学成分报道较少，其主要含有三萜、倍半萜、植物甾醇等。菊科植物富含倍半萜内酯等成分，现代药理研究表明，倍半萜内酯类化合物具有很好的活性，如抗肿瘤、抗炎、抗氧化等。目前，国内外除本实验室曾对大叶盘果菊的石油醚萃取部位化学成分进行研究外，尚未见其化学成分及相关药理活性的报道。

为充分开发利用这一我国特有的植物资源，发明人对大叶盘果菊全草的化学成分及活性进行系统、深入的研究，分离鉴定出一个愈创木烷型倍半萜。体外抗肿瘤活性筛选表明，该化合物有较强的细胞毒活性，为后续深入的研究奠定基础。

发明内容

本发明提供了一个愈创木烷型倍半萜化合物15-hydroxy-2-oxo-guaia-3-eh-1α，5α，6β，7α，10α，11βH-12，6-olide的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用，其化学结构式见附图。本发明化合物可按以下步骤制备：

大叶盘果菊干燥全草，粉碎后经95％乙醇室温浸泡提取，减压浓缩去醇得总浸膏。总浸膏用水悬浮后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇3个萃取层。正丁醇层上硅胶柱层析，用乙酸乙酯-甲醇极性梯度洗脱，最后用甲醇冲柱，TLC检测合并成分相同部分。倍半萜富集流分过Sephadex LH-20柱，氯仿-甲醇极性梯度洗脱，经TLC检测，取有土黄色斑点的组分，上硅胶小柱，用石油醚-乙酸乙酯极性梯度洗脱，部分组分有白色粉末析出，再经制备型高效液相色谱仪纯化得该化合物纯品。

具体实施方式

下面的实施例可以使专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

实施例1：本发明化合物的提取、分离及结构鉴定

(1)、提取：取5.5kg大叶盘果菊干燥全草，粉碎后经95％乙醇室温浸泡提取4次，每次7天。减压浓缩去醇后，得浸膏320g。浸膏用水悬浮后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，得到石油醚部分60g，乙酸乙酯部分80g和正丁醇部分130g。

(2)、分离：正丁醇层用等量硅胶拌样上硅胶柱层析，用乙酸乙酯-甲醇(1∶0～0∶1)极性梯度洗脱，最后用甲醇冲柱，合并成分相同部分后共得8个组分(Fr I～FrⅧ)。FrⅢ过SephadexLH-20柱，氯仿-甲醇极性梯度洗脱，经TLC检测，取有土黄色斑点的组分，用等量硅胶拌样，上硅胶小柱(200-300目)，用石油醚-乙酸乙酯极性梯度洗脱，待溶剂挥发后有白色粉末析出。白色粉末用甲醇溶解后经制备型高效液相色谱仪，以甲醇-水为洗脱剂分离得该化合物纯品。本发明化合物的结构鉴定

化合物1：无色针晶(乙酸乙酯)，5％硫酸乙醇溶液显土黄色。EI-MS(m/z)：264[M⁺]。¹³C-NMR和DEPT谱显示有2×CH₃，3×CH₂，7×CH，3×C共计15个碳信号，初步推断该化合物为倍半萜。¹³C-NMR可见δ211.6为α，β不饱和酮羰基的碳信号，一对双键信号δ129.2和186.2，其中186.2由于与酮羰基共轭使其移向低场。在δ180.4为另一羰基碳信号，δ83.4为一个与氧相连的碳信号，结合NMR谱和质谱推出分子式为C₁₅H₂₀O₄，不饱和度为6。¹H-NMR谱中出现两个甲基二重峰δ1.19(3H，d，J＝6.8Hz)，0.77(3H，d，J＝7.6Hz)，结合质谱和生源关系，提示该化合物具有愈创木烷型倍半萜内酯的结构特征。

本发明化合物的波谱学数据如下：