[发明专利]轮枝拟青霉菌株及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来说涉及轮枝拟青霉菌株，同时还涉及其用途。 

背景技术

虫草菌素(cordycepin)是一类首次从蛹虫草中分离出来的核苷类抗菌物，具有多种生物活性值，蛹虫草可以作为冬虫夏草的替代品，2009年通过了新食品的认证。随着市场对虫草菌素的需求越来越多，而野生的蛹虫草中虫草菌素含量不高，一般在0.1％或者更低，很难满足商业虫草菌素含量要达2％的要求。随着野生的冬虫夏草的价格一路上涨，目前已经涨至每公斤20万元左右，使野生蛹虫草受到疯狂采摘。所以从资源保护方面考虑，寻找能够产虫草菌素的蛹虫草替代菌株，扩大虫草菌素的药源，是极需要解决的问题。 

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种菌株容易培养保存及工业化生产，能够产虫草菌素的轮枝拟青霉菌株。 

本发明的另一目的在于提供该轮枝拟青霉菌株在产虫草菌素方面的用途。 

该菌种已于2009年12月14日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：中国 武汉 武汉大学)，名称为：轮枝拟青霉(Paecilomyces verticillatusGZ)，保藏号：CCTCC NO：M 209302。 

本发明的轮枝拟青霉(Paecilomyces verticillatus GZ)，具有以下微生物学特性： 

1、形态学特性：轮枝拟青霉GZ查氏培养基上，25℃，14天，菌落直径35-55mm，隆起，白色绒毛状，呈不规则形；背面白色。菌丝宽约1.2-1.8μm，可形成长约9.6-19.8μm的分生孢子梗，多数瓶梗柱状或锥形，常轮生或互生和对生于气生菌丝上，向上逐渐变细或突然变细，7.8-14.4×1.2-2.4μm，颈部纤细，约对轮枝拟青霉，有时是基部的1.2倍长。分生孢子透明，光滑，明显有大小不同的两种孢子，大孢子梭形，椭圆型，1.8-3.0×1.8-2.4μm，小孢子近球形、椭圆形，1.2-1.8×0.6-1.2μm，成直链或聚成团。 

2、培养学特性：轮枝拟青霉GZ在沙氏培养基上，25℃，14天，菌落直径35-40mm，平展，中间隆起，白色，毡状，具有3-5条不规则的深 沟纹，边缘不规则；背面呈浅黄色。菌丝宽0.5-1.5μm，分隔，透明，光滑。分生孢子梗短或无；轮生体由3-5个瓶梗组成。瓶梗基部柱状或梭形膨大，向上逐渐或突然变细；颈部宽小于0.5μm。分生孢子透明，光滑，近球形至卵圆形，1.5-2.5×1.2-2.5μm，排列成长链。 

轮枝拟青霉GZ在PDA固体培养基上，菌落直径约55mm左右，平展，致密毯状，灰白色；背面浅黄色。 

3、生理学特性：于pH 5～7，20至30℃下能正常生长。 

4、菌学特性：根据Brown & Smith(1957)的分类标准以及拟青霉属菌落形态特征：菌丝发育良好，分生孢子成串，分生孢子梗顶端不膨大，孢子梗顶端轮轴状分枝，顶端的轮轴状分枝大小不等，孢子近于球形。分生孢子和帚状枝外无胶质覆被。分生孢子壁薄，基部无环状加厚，瓶形小梗排列不规则，顶细长而弯曲，孢子丛不呈绿色。分生孢子梗和分枝比青霉属的更加分散。拮抗菌株鉴定为拟青霉(Paecilomyces spp)。 

对轮枝拟青霉(Paecilomyces verticillatus GZ)产虫草菌素的培养方法如下： 

轮枝拟青霉(Paecilomyces verticillatus GZ)菌株于PDA斜面上，27℃，7d，活化3次，接入到PDA液体种子培养基中，140rpm，26℃，摇瓶培养3d，得液体母种，以0.04(v/v)接种量接入到白砂糖2％、麦芽糖1％、牛肉膏2％、酵母膏3％的发酵培养基中，140rpm，27℃，摇瓶培养7d，得到待测液，进行HPLC测定虫草菌素含量。 

本发明主要以筛选得到的轮枝拟青霉(Paecilomyces verticillatus GZ)为基础，进行完整的发酵过程，结果证明轮枝拟青霉发酵可以产生虫草菌素，这可以一定程度上缓解人们对虫草菌素的需求。 

具体实施方式

轮枝拟青霉菌株的筛选方法，包括下列步骤： 

(1)菌株的分离方法： 

a)土壤样品菌液的制备 

在实验室内，将采集回来自然条件下烘干的土壤样品捡除枯枝败叶、小石块等杂物，每份土壤土样各称取10g，分别溶解于装有90mL无菌水并带有玻璃珠的250mL三角瓶中，充分振荡20-30min，使土样充分溶解后静置20min，使土样成为土壤菌液