[发明专利]同步检测啤酒花中黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分析技术领域，尤其涉及一种同步检测啤酒花中黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素的方法。

背景技术

啤酒花(Humulus lupulus L.)是桑科律草属的多年生草本植物，它是啤酒酿造中的重要原料之一，能够赋予啤酒特有的芳香与爽口的苦味，维持啤酒泡沫的稳定性并且具有一定防腐能力。啤酒花中含有丰富的黄酮类物质，其中，黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素因其具有良好的生物活性而受到越来越多关注。黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素的结构式分别如下所示：

黄腐酚    异黄腐酚    8-异戊烯基柚皮素

黄腐酚(Xanthohumol，简称XN)是啤酒花中特有的异戊烯基黄酮，其含量为啤酒花干重的0.1～1％。目前研究表明啤酒是人体摄入黄腐酚的唯一途径。黄腐酚具有良好的生理活性，是一种良好的癌症预防剂，它可以通过抑制致癌前体物质的代谢来阻止癌细胞在早期的生长，从而起到有效预防癌症的作用。此外，黄腐酚在抗氧化方面，预防、治疗糖尿病方面以及抗病毒方面均有一定的功效。

异黄腐酚(Isoxanthohumol，简称IXN)是黄腐酚在加热过程中产生的一种同分异构体。在啤酒酿造的麦汁煮沸过程中，大部分黄腐酚会被异构化为异黄腐酚，因此啤酒中异黄腐酚含量远高于黄腐酚，虽然异黄腐酚的生理活性没有黄腐酚那么强，但在体外实验中它也显示出了预防癌症等积极的效果。

8-异戊烯基柚皮素(8-prenylnaringenin，简称8-PN)是异黄腐酚脱甲基后的衍生物，被认为是目前最有效的植物雌性激素，可以有效预防骨质疏松、乳腺癌，且可以延缓更年期。8-异戊烯基柚皮素现已逐步作为天然激素被人们认可，并被认为是激素代替疗法的未来替代品。

目前国内关于这三种黄酮类物质的同步检测方法研究甚少，王宁等公开了一种用RP-HPLC方法测定啤酒花中黄腐酚的方法(RP-HPLC法测定啤酒花中的黄腐酚；《食品工业科技》，2009年05期)，该方法较好地解决了黄腐酚的检测问题，但对于啤酒花中另两种重要的物质并未进行深入研究。同样，公开号为CN101337876A的中国专利申请中也只公开了黄腐酚的检测方法，对另两种物质的检测未有涉及。

发明内容

本发明提供了一种利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同步检测啤酒花中黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素的方法，该方法的精密度高，操作简单。

一种同步检测啤酒花中黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素的方法，包括步骤：

(1)待测样品的预处理：用有机溶剂提取含啤酒花的待测样品，过滤，所得滤液用有机溶剂定容，获得样品待测液；

(2)RP-HPLC-紫外检测：采用反相碳十八色谱柱和紫外可见分光检测器，流动相为乙腈和水相的混合溶液，流速为0.7ml/min～1.0ml/min，采用梯度洗脱，在双检测波长350nm～390nm和260nm～290nm分析样品待测液，得到样品待测液的色谱图；

所述的水相为甲酸质量百分比浓度为0.5％～1.5％的甲酸水溶液；

(3)将样品待测液的色谱图上的峰面积在标准工作曲线上回归，计算样品待测液中黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素的含量。

步骤(1)中，所述的有机溶剂选用本领域对黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素具有很好的溶解性且不与黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素进行化学反应的有机溶剂，优选乙醇、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷或者正丁醇中的一种。

步骤(1)中，所述的含啤酒花的待测样品可选自啤酒花粉末(即啤酒花颗粒经研磨过筛而得到的粉末)、啤酒花的乙醇浸膏、啤酒花的CO₂萃取浸膏等市售产品中的一种。

为了提高提取的效率及效果，所述啤酒花粉末粒径优选小于60目。

步骤(1)中，所述的提取条件优选为：在功率为300W～450W超声条件下于30℃～45℃回流提取20min～60min，该提取条件可以更好地提取出啤酒花中所含的黄腐酚、异黄腐酚和8-异戊烯基柚皮素。

步骤(1)中，有机溶剂与含啤酒花的待测样品的质量比优选为10～15∶1，以保证在提高提取效果的前提下节约资源。