[发明专利]可稳定自发光的细菌质粒及其制备方法

权利要求书

1.一种可稳定自发光的细菌质粒，其包含至少一luxABCDE自发发光基因、至少一可启动luxABCDE自发发光基因的启动子、至少一ColE1复制子、至少一抗性基因、至少一pir基因、至少一parG基因、至少一parF基因、至少一stbD基因与至少一stbE基因，以及包含至少一pilX1基因、至少一pilX2基因、至少一pilX4基因、至少一pilX5基因、至少一pilX6基因、至少一pilX7基因、至少一pilX8基因、至少一pilX9基因、至少一pilX10基因、至少一pilX11基因、至少一taxA基因、至少一taxB基因与至少一taxC基因。

2.如权利要求1所述的可稳定自发光的细菌质粒，其特征在于，该可启动luxABCDE自发发光基因的启动子为P_lacZ启动子。

3.如权利要求1所述的可稳定自发光的细菌质粒，其特征在于，该抗性基因包含对氨比西林(ampicillin)的抗性基因。

4.如权利要求1所述的可稳定自发光的细菌质粒，其特征在于，该抗性基因包含对卡那霉素(kanamycin)的抗性基因。

5.如权利要求1所述的可稳定自发光的细菌质粒，其特征在于，该抗性基因包含对氨比西林(ampicillin)的抗性基因与对卡那霉素(kanamycin)的抗性基因。

6.如权利要求1所述的可稳定自发光的细菌质粒，其特征在于，该可稳定自发光的细菌质粒为如SEQ ID NO：1所述的核甘酸序列。

7.一种制备可稳定自发光的细菌质粒的方法，包含下列步骤：

(a)、将缺乏启动子的发光基因(luxABCDE)接入一含启动子的质粒中，使发光基因(luxABCDE)可利用启动子来启动转录。

(b)、将含至少一ColE1复制子及至少一抗性基因的革兰阴性细菌质粒接入质粒pSE34中。

(c)、将步骤(a)所构筑的质粒接入步骤(b)所构筑的质粒中以制得该革兰阴性细菌专用的稳定自发发光载体。

8.如权利要求7所述的制备可稳定自发光的细菌质粒的方法，其特征在于，步骤(a)所述的启动子可为P_lacZ启动子。

9.如权利要求8所述的制备可稳定自发光的细菌质粒的方法，其特征在于，步骤(a)所述的含启动子的质粒可为质粒pGEM3-Zf+。

10.如权利要求9所述的制备可稳定自发光的细菌质粒的方法，其特征在于，步骤(a)所述的缺乏启动子的发光基因(luxABCDE)来自质粒pXen-5。

11.如权利要求7所述的制备可稳定自发光的细菌质粒的方法，其特征在于，步骤(b)所述的至少一ColE1复制子及至少一抗性基因的革兰阴性细菌质粒可为质粒pBlueScript II KS(+/-)。

12.一种革兰阴性细菌的质粒，于细菌细胞分裂时该质粒可稳定地分配于子细菌中，且使细菌与其他菌种细菌间可以利用接合生殖作用来散布该质粒，该质粒系包含至少一pir基因、至少一parG基因、至少一parF基因、至少一stbD基因与至少一stbE基因，以及包含至少一pilX1基因、至少一pilX2基因、至少一pilX4基因、至少一pilX5基因、至少一pilX6基因、至少一pilX7基因、至少一pilX8基因、至少一pilX9基因、至少一pilX10基因、至少一pilX11基因、至少一taxA基因、至少一taxB基因与至少一taxC基因。

13.如权利要求12所述的革兰阴性细菌的质粒，其特征在于，该质粒为如SEQ ID NO：2所述的核甘酸序列。