[发明专利]高通量单核苷酸多态性检测方法

权利要求书

1.一种高通量单核苷酸多态性检测方法，其特征在于检测步骤为：

a.磁性纳米颗粒的修饰：对无荧光背景的磁性颗粒表面进行功能化修饰；

b.引物的设计：选取待检测的重要功能SNP位点或突变位点，根据上述位点碱基序列设计单碱基延伸引物，引物的3’端与SNP位点的上游一个碱基互补，5’端经过功能化修饰共价连接到磁珠表面，得到延伸引物-磁珠复合物；

c.制备磁珠阵列：选取洁净的载玻片，其一面粘附有杂交反应池，载玻片另一面年附有永磁体，将延伸引物-磁珠复合物点样于杂交反应池之内，复合物通过永磁体磁场固定于玻片表面；

d.扩增样本的全基因组扩增产物或者多重PCR产物；

e.延伸反应：延伸反应的体系中包括磁珠延伸引物，扩增产物模板DNA，与待检测相关SNP位点相对应的荧光标记的ddNTP，Mg²⁺、缓冲液、DNA聚合酶，通过退火使得靶序列和延伸引物结合，在DNA聚合酶的作用下，与待检测位点相对应的荧光标记的ddNTP延伸在引物3’端；

f.反应完成后，经洗涤，去除微流体反应池盖片和磁体，应用生物芯片扫描仪获得所检测样本的生物信息。

2.根据权利要求1所述的高通量单核苷酸多态性检测方法，其特征在于检测步骤a中所描述的磁性纳米颗粒表面所修饰的功能基团为亲合素、链霉亲和素、纳米金或醛基，与上述修饰基团所对应的b步骤中引物5’端修饰为生物素、生物素、巯基和氨基。

3.根据权利要求1所述的高通量单核苷酸多态性检测方法，其特征在于检测步骤e中所描述的延伸反应体系，采用双色延伸杂交，对于C->T(G->A)SNP位点，使用双色荧光标记的ddATP和ddGTP，或者ddCTP和ddTTP；

4.根据权利要求1所述的高通量单核苷酸多态性检测方法，其特征在于检测步骤e中所描述的延伸反应体系，采用双色延伸杂交时，对于C->A(G->T)SNP位点，使用双色荧光标记的ddATP和ddCTP，或者ddTTP和ddGTP。

5.根据权利要求1所述的高通量单核苷酸多态性检测方法，其特征在于检测步骤e中所描述的延伸反应体系，采用双色延伸杂交时，对于C->G(T->A)SNP位点，使用双色荧光标记的ddATP和ddTTP，或者ddCTP和ddGTP。

6.根据权利要求1所述的高通量单核苷酸多态性检测方法，其特征在于检测步骤e中所描述的延伸反应体系，采用单色延伸杂交时，四个独立反应池中延伸试剂分别加入不同的荧光标记的ddATP、ddCTP、ddTTP和ddGTP。