[发明专利]一种纳米纤维固定化β-D-半乳糖苷酶的制备方法

权利要求书

1.一种纳米纤维固定化β-D-半乳糖苷酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)静电纺丝法制备苯乙烯-马来酸酐共聚物(PSMA)纳米纤维：将一定量的PSMA溶解于有机溶剂中，在室温磁力搅拌的条件下充分溶解制得浓度为20～40％(w/v)的电纺液；将电纺液吸入注射器内进行静电纺丝，控制注射器针头至接收板的距离为10～30cm，电纺液流速为250～1000μL/h，电压在15～50kV之间调节，制得PSMA纳米纤维，室温放置直至溶剂完全挥发；

(2)PSMA纳米纤维的预处理：取PSMA纳米纤维在25％(V/V)的乙醇水溶液中浸泡15min以增加其亲水性，再分别用水和缓冲溶液冲洗；

(3)β-D-半乳糖苷酶的固定化：用pH值介于2.5～8.0的缓冲溶液配制0.1～5.0mg/mL的β-D-半乳糖苷酶溶液；将乙醇处理后的PSMA纳米纤维浸入β-D-半乳糖苷酶溶液中，在4～25℃条件下于摇床振荡固定化0.5～15h；取出固定化酶用缓冲溶液充分洗去纤维表面未固定化的酶，最后浸泡在0.2mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中(pH4.5)，于4℃保存。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的有机溶剂是N，N-二甲基乙酰胺、N，N二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二甲基亚砜中的一种、或其中任意两种的混合物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的纳米纤维可以是纳米纤维膜、纳米纤维丝、纳米纤维球或表面偶联纳米纤维丝的纤维球，优选的是纳米纤维膜和纳米纤维丝。