[发明专利]一种全反式维甲酸与脂质体的复合物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域的一种全反式维甲酸与脂质体的复合物及其应用。

背景技术

肿瘤干细胞在肿瘤的发生、转移和复发过程中起着重要作用，并且肿瘤的复发是导致肿瘤治疗失败的主要原因。与正常组织的干细胞相似，肿瘤干细胞具有自我更新和分化(即成为更加成熟的肿瘤细胞)的能力。在正常的组织中，一个干细胞分裂出另一个干细胞和一个分化了的细胞，从而使干细胞的数量保持恒定，并且受到严格的限制。但是肿瘤干细胞可以分裂出多个新的肿瘤干细胞，而这个过程的持续会导致肿瘤细胞数量的增加，引起肿瘤的复发。有证据显示具有CD44⁺/CD24^-表型的乳腺癌干细胞具有很强的成瘤能力，一个例子是仅仅很少量的具有这种表型的细胞即可形成新的肿瘤，而具有其他表型的普通肿瘤细胞(non-cancer stem cell)需要百万个才能在SCID小鼠中形成肿瘤。另一个例子是只需要100个CD44⁺/CD24^-就可以在NOD/SCID小鼠体内诱导形成肿瘤。

最近，一项临床研究表明在乳腺癌患者中乳腺癌干细胞(CD44⁺/CD24^-)对传统的化学疗法不敏感，有一定的抵抗作用。肿瘤干细胞与肿瘤细胞相比有很多不同之处，其中，以下量方面主要和肿瘤干细胞的耐药相关：一是由于肿瘤干细胞强大的DNA修复功能，它们对凋亡刺激表现出明显的耐受能力，比如具有CD44⁺表型的乳腺癌干细胞能够耐受放射治疗；二是肿瘤干细胞多数处于静止状态，而抗肿瘤的化疗大多数是针对分裂期的细胞，所以肿瘤干细胞能够在化疗中幸免并且重新形成肿瘤，导致肿瘤复发。所以传统的放疗和化疗只能杀死大部分普通肿瘤细胞，而对肿瘤干细胞表现出较弱的抑制作用。因为肿瘤的潜在复发是由于肿瘤干细胞对于化疗药的耐药，所以很有必要提出一种新的方法通过非凋亡和非坏死途径来清除肿瘤干细胞，比如通过诱导肿瘤干细胞分化的方式来降低它们对化疗药的耐受性。

使用分子标志物来鉴定肿瘤干细胞，比如乳腺癌干细胞的CD44⁺/CD24^-，白血病干细胞的CD34⁺/CD38^-。具有这类表型的肿瘤干细胞即SP细胞，它们只需要很少的数量即可产生大量的肿瘤细胞。SP细胞被鉴定在很多中细胞系中存在，比如成神经细胞瘤，黑色素瘤和C6胶质瘤细胞系。乳腺癌细胞中的SP细胞是一类不成熟的祖先肿瘤细胞，高表达干细胞标志物(CD44⁺/CD24^-)并且低表达分化细胞标志物(CD44^-，CD24⁺)。除此之外，SP细胞具有较高的Hoechst外排活性，所以利用Hoechst荧光染料外排法收集肿瘤干细胞。

因此，研究一种新型抑制肿瘤干细胞增殖并诱导肿瘤干细胞分化的药物制剂成为发展热点。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种全反式维甲酸与脂质体的复合物。

本发明提供全反式维甲酸与脂质体的复合物，由脂质体和包封在其内的全反式维甲酸组成。所述复合物可由下述方法制的：

1)将脂材和全反式维甲酸用氯仿溶解，旋转蒸发去除氯仿，获得脂膜和全反式维甲酸的混合物；2)将所述脂膜和全反式维甲酸的混合物水化得到水化产物；3)将所述水化产物超声，获得全反式维甲酸与脂质体的复合物。

所述脂质体由蛋黄卵磷脂、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000制成；

步骤1)中所述脂材为蛋黄卵磷脂、胆固醇和PEG2000-DSPE(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000)；所述蛋黄卵磷脂、胆固醇和PEG2000-DSPE(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000)的摩尔比为(57-61)∶(37-41)∶(3.5-5.5)，具体为59∶39∶4或57∶37∶3.5或61∶41∶5.5；所述全反式维甲酸与所述脂材的质量比为(18-22)∶(0.8-1.2)，具体为20∶1或18∶0.8或22∶1.2；

步骤2)中所述水化的方法是：将所述脂膜和全反式维甲酸的混合物和磷酸盐缓冲液混合，在(24-26)℃下持续超声(9-11)min，具体为在24℃、25℃或26℃下超声9min、10min或11min；

步骤3)中，所述超声的功率为200W，所述超声时间为(5-7)min，具体为5min、6.8min或7min，所述超声方式为超声10秒，间断10秒。