[发明专利]一种制作微生物肥料高浓度菌粉的方法

权利要求书

1.一种制作微生物肥料高浓度菌粉的方法，其特征在于利用成熟的、以商品化的胶冻样芽胞杆菌、侧孢芽孢杆菌来生产复合生物肥料用芽孢菌粉。

1.1胶冻样芽胞杆菌发酵工艺流程

将胶冻样芽孢杆菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，制做斜面菌种。取少量菌种，转接至克氏瓶斜面培养基上，进行扩大培养(30℃恒温培养2-5天)，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，制成克氏瓶斜面菌种。将菌种于30℃恒温培养2-5天，加40-50ml无菌水洗涤，制成芽孢悬液。将500L种子罐中培养基于0.11MPa，蒸汽压力实罐消毒30分钟，将芽孢悬液接种到种子罐中，30℃培养15-20h，罐压0.05MPa，通气比1∶1V/Vm，菌体培养至对数生长后期。将5m³发酵罐中培养基于0.11MPa，蒸汽压力实罐消毒30分钟。将菌体及培养液一并转移至5m³发酵罐中，30℃培养30-40h，罐压0.05MPa，通气比1∶0.7-1V/Vm，菌体90％以上形成芽孢后，芽孢脱落50-60％，发酵结束，最终得到芽孢含量在6-7亿/克的发酵液。

1.2侧孢芽孢杆菌发酵工艺流程

将侧孢芽孢杆菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，制做斜面菌种。取少量菌种，转接至克氏瓶斜面培养基上，进行扩大培养(34-35℃恒温培养2-5天)，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，制成克氏瓶斜面菌种。将菌种于34-35℃恒温培养2-5天，加40-50ml无菌水洗涤，制成芽孢悬液。将500L种子罐中培养基于0.11MPa，蒸汽压力实罐消毒30分钟，将芽孢悬液接种到种子罐中，34-36℃培养10-15h，罐压0.05MPa，通气比1∶1V/Vm，菌体培养至对数生长后期。将5m³发酵罐中培养基于0.11MPa，蒸汽压力实罐消毒30分钟。将菌体及培养液一并转移至5m³发酵罐中，34-36℃培养18-25h，罐压0.05MPa，通气比1∶0.7-1V/Vm，菌体90％以上形成芽孢，发酵结束，最终得到芽孢含量在12-14亿/克的发酵液。

1.3上述两种发酵液经高速离心浓缩、混合、喷雾干燥制成菌粉。

2.根据权利要求1，其特征在于：胶冻样芽胞杆菌菌种和侧孢芽孢杆菌菌种分别是发明者自行从土壤中筛选出的优质菌株。

3.根据权利要求1，其特征在于：胶冻样芽孢杆菌培养中发酵罐培养基和种子罐培养基一致，其组成为：淀粉5克，豆粉3克，糖1克，CaCO₃1克，硫铵0.5克，油2升，水1升，Ph7.0。斜面培养基和克氏瓶培养基一致，均为硅酸盐细菌培养基，其组成为：蔗糖(C₁₂H₂₂O₁₁)5.0g，磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)2.0g，硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.5g，碳酸钙(CaCO₃)0.1g，三氯化铁(FeCl₃·6H₂O)0.005g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL，pH7.5～8.0。

4.根据权利要求1，其特征在于：侧孢芽孢杆菌培养中发酵罐培养基和种子罐培养基一致，其组成为：豆饼粉4克，玉米粉4克，红薯粉4克，CaCO₃2克，水1升，Ph自然。斜面培养基和克氏瓶培养基一致，均为营养琼脂，其组成为：蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，氯化钠(NaCl)5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL，pH7.2～7.5。

5.根据权利要求1，其特征在于：高速离心时，将发酵液用碟片式离心机(7302转/分钟)，具体控制参数：密封时间3秒，密封周期1分钟，排渣时间1秒，排渣周期10分钟，密封水时间3秒进行浓缩，得到浓缩10倍菌液。

6.根据权利要求1，其特征在于：混合时，将两种菌的浓缩液按照1∶1的比例混合。

7.根据权利要求1，其特征在于：喷雾干燥时，将混合好的菌泥添加按1/0.3-0.4CaCO3进行喷雾干燥，当进口温度达到140-150℃，开始喷雾，控制流入离心盘浆液的速度，使喷雾的干燥塔中层的温度保持在60-65℃。