[发明专利]一种组织培养总统铁线莲的方法

权利要求书

1.一种组织培养总统铁线莲的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)获取无菌原材料：摘取铁线莲‘总统’嫩芽后用自来水冲洗2h，在超净工作台上依次用浓度为75wt％的乙醇浸泡25-35s，1w‰的升汞浸泡10-15min，用无菌水冲洗5-6次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成1cm长后接种于芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基5周后，芽基部开始膨大并出现黄绿色突起，继续培养3周后可见明显的愈伤组织，再培养1个月，切下带芽的愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上；

(3)不定芽的壮苗培养：在不定芽增殖培养基上诱导出的丛生芽，每丛有2-3株伸长，将其分成小丛或单芽后接种于壮苗培养基上，不定芽20天后可以长到2-3cm；

(4)生根培养：取2-3cm的不定芽植株，将其转接入生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后根原基长至4-6cm；

(5)植株炼苗与移栽：步骤(4)得到的根原基继续生根培养20-30天，选择根系发达生长健壮的无菌苗于室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后移栽室外并给予肥水管理，即可得到铁线莲‘总统’植株。

2.根据权利要求1所述的一种组织培养总统铁线莲的方法，其特征在于，所述的芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L或MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。

3.根据权利要求1所述的一种组织培养总统铁线莲的方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L或MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

4.根据权利要求1所述的一种组织培养总统铁线莲的方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L或MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。

5.根据权利要求1所述的一种组织培养总统铁线莲的方法，其特征在于，所述的生根培养基的成分为MS+NAA0.1mg/L+IBA1.0mg/L、MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L或MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L。

6.根据权利要求2或3或4或5所述的一种组织培养总统铁线莲的方法，其特征在于，所述的培养基成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的pH值为5.6-6.0，培养温度为24-26℃，光照条件采用70-90μmol/ms。