[发明专利]一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物应用技术领域，涉及益生菌的制备，特别涉及一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法。

背景技术

目前农用益生菌制剂大多作为饲料、饲料添加剂、饲料发酵剂、农业用发酵剂或粪便无害化处理剂等多用途使用，在改善动物体内微生态环境、增强免疫力、预防疾病、促进生长以及改善养殖环境等方面产生了巨大的经济效应和社会效应。世界多国都有不同类型的益生菌制剂的产品问世，日本在研制开发和利用益生菌制剂方面处于领先，已经研制和投产的产品主要有：EM-1号、EM糠和由EM-1号原菌进一步研发的营养搭档伴侣、曙光一号活菌制剂等。其产品制备过程中菌群培养所用的培养基均采用成分复杂、价格昂贵的专用培养基；制备工艺均采用专用培养基培养后，通过高速离心，收集菌体细胞，再通过冻干或喷雾干燥制得原菌粉(剂)。该法操作过程复杂，设备要求高，成本昂贵，规模化应用受限。

我国在此方面的研究起步较晚，90年代后期才逐渐进入产业化研制阶段，但关键技术，比如菌种、培养基和制备工艺等均被国外所垄断。目前国内使用的一些产品都非原菌粉(剂)，而是直接引进国外产品或技术或合资将原菌剂活化、复壮、扩培后加工而成，例如：畜禽益生菌(光合菌，乳酸菌、酵母菌、革兰氏阳性放线菌)、乳康生(腊样芽孢杆菌、干酪乳杆菌)，生物益生菌补充饲料(植物乳杆菌、酵母菌、乳酸菌)等。从而导致产品依赖性强，无竞争性。

发明内容

本发明解决的技术问题在于提供一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，以鲜苹果渣为原料，通过益生菌菌群比例、培养条件、培养方式的综合控制，生产复合益生菌制剂制。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，包括以下步骤：

1)培养基的配置

将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶8～12的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量1.0％～5.0％的尿素和1.5％～3.5％的乳清粉，混匀，110～121℃灭菌30min，得到苹果渣培养基；

2)益生菌菌种的活化

将乳酸菌以1～4×10⁶cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，35℃～45℃培养2～3天后，得到乳酸菌活化的培养基；

将酵母菌以1～8×10⁶cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，28℃～33℃培养2～3天，得到酵母菌活化的培养基；

将芽孢杆菌以1～4×10⁶cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，30℃～37℃培养2～3天，得到芽孢杆菌活化的培养基；

3)益生菌培养、制剂

在新鲜苹果渣培养基中投入其质量6～10％的益生菌活化的培养基，其中，乳酸菌活化的培养基为2.0～4.5％、酵母菌活化的培养基为3.0～5.5％、芽孢杆菌活化的培养基为1.0～2.5％；35～39℃下无菌静置培养3～4天后，加入乳酸链球菌素和纳他霉素，使乳酸链球菌素的浓度为1～2.5mg/L，纳他霉素的浓度为3～6mg/L，得到益生菌制剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明打破了传统益生菌制剂中菌群的培养必须用专用培养基培养的模式，而是采用农产品加工废弃物苹果渣为培养基，结合“母子同体”法培养，即益生菌的活化所用的培养基与益生菌制剂所用的培养基一致。这样一方面可最大限度缩短菌体对环境适应和发酵垫料启动的时间；另一方面可变废为宝，降低生产成本。

本发明采用包括乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌的混合菌群共培养，并通过益生菌菌群比例、培养条件和培养方式(35～39℃，无菌静置培养)、的综合控制，使混合菌群中的不同菌种均可达到最佳的生长状态(共生长、活力强)和最大的活菌数；培养结束后经调配(加入乳酸链球菌素和纳他霉素作为防腐剂)，即可制得该益生菌制剂。制成的益生菌制剂随着时间的延长，总的活菌数会逐渐减少，但在常温保存一年后，益生菌制剂的总活菌数仍不低于10⁸cfu/ml。

本发明采用的方法无需离心、冻干或其它干燥过程，工艺及设备简便，成本低，易规模化推广应用，适宜于农业/畜业生产使用。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细描述，所述是对本发明的解释而不是限定。

实施例1

利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，包括以下步骤：

1)培养基的配置