[发明专利]猴泡沫病毒的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中病毒的分子生物学检测方法，特别是涉及猴泡沫病毒的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。

背景技术

猴泡沫病毒(Simina Foamy Viruses，SFV)的传染源主要为大猩猩、非洲大狒狒、长尾猴，主要存在于非洲、美洲和亚洲，在经常接触非人灵长类(non-human primates，NHPs)人群中的传播时有发生。SFV通过体液进行传播，可以遗传给后代。动物工作者中，SFV感染比猴免疫缺陷病毒(SIV)感染更为普遍，而且潜伏期较长。SFV虽然不会对灵长类动物致病，但在物种间的传播会引起致病性的改变，SFV的感染对人类来说意义重大。SFV的致病性研究一直受到各国学者的关注，有学者认为其有可能对人类致病，也有报道其不明显的致病作用使得SFV成为逆转录病毒基因转移载体而被用于基因治疗。近来有研究人员提出病毒从灵长类动物传染给人的频率要比原先预想的高。因此，对SFV的研究越来越受到专家们的高度重视。

Wolfe等人对喀麦隆9个丛林地区的1100名猎人进行筛查时，在接触过大猩猩、非洲大狒狒和长尾猴等动物体液的10个人的血液中发现一种病毒抗体。由于这种病毒和艾滋病病毒非常相似，传染途径也和艾滋病病毒类似，有专家称其为“准艾滋病病毒”。Wolfe通过分析比较感染者血液中的病毒基因组序列，发现“准艾滋病病毒”是一种猴泡沫病毒，并第一次证明这种逆转录病毒可以传染给人类，而且在人类宿主中能持续存在(Wolfe ND，Switzer WM，Carr JK，etal.Naturally acquired simianretrovirus infections in central African hunters.Lancet，2004，363：932937.)。

SFV属于逆转录病毒科(Retrovidae)，泡沫病毒亚科(Spumavirinae)。泡沫病毒(Foamy Virus，FV)有11个血清型，而感染恒河猴的主要是1型猴泡沫病毒(SFV-1)。现已在几种灵长类动物体内分离到SFV，包括SFV-1型、SFV-3型、SFV-6型和黑猩猩的猴泡沫病毒(SFVcpz)。

SFV为单正链RNA病毒，是迄今发现的基因组最长的逆转录病毒。SFV-1、SFV-3基因组RNA分别为11.52kb、11.62kb，前病毒eDNA为12-13kb。其基因组结构为两端为长末端重复序列(LTR)，中间部分有gag、pol、env三个结构基因，从5′端到3′端以gag-pol-env二聚体形式装配在病毒粒子中。其中，pol编码逆转录酶，gag编码病毒壳蛋白，env编码囊膜糖蛋白。

加强实验用猴和猴源性生物制品的病毒检测不仅可以保证疫苗等生物制品的安全性，同时也减少了人类的逆转录病毒感染率。目前，国内外一系列高敏感性的检测方法已用于检测动物SFV的感染状况，以及分析猴源性生物制品(如减毒活疫苗)的SFV污染情况。PCR技术由于其快速、安全且具有较高敏感性和特异性等优点被广泛应用。任丽虹等人建立了猴血中SFV基因PCR检测方法(任丽虹，白巍，林凌.猴血中SFV病毒基因PCR检测方法的建立及应用.中国病毒学，2001，16(2)：179-182.)。李华等在评价脊髓灰质炎减毒活疫苗的安全性中，用RT-PCR结合PCR方法对生产用的毒种、半成品及成品糖丸疫苗进行了检测，对保证疫苗的安全具有重要意义(李华，胡凝珠，谢忠平等.脊髓灰质炎减毒活疫苗中SV40和泡沫病毒的检测.中国生物制品学杂志，2004，17(4)：229-232.)。