[发明专利]药品、保健食品中掺杂硝西泮的快速测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硝西泮成分的检测方法，具体是检测药品和保健食品中，尤其是用于检测镇静安神类中药制剂和养心安神功能保健食品中是否添加硝西泮成分的方法。

背景技术

硝西泮是苯二氮杂卓类镇静催眠药，化学名称为1，3-二氢-7-硝基-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮卓-2-酮。主要治疗失眠以及抗惊厥、婴儿痉挛、肌阵挛癫痫。临床药理学研究表明，此药物在镇静、催眠方面的药效优于巴比妥类及其它类镇静、催眠药，药物过量一般不致引起生命危险，因此硝西泮临床应用广泛。

硝西泮为中枢神经抑制药，可引起中枢神经系统不同部位的抑制，作用机制与其选择性作用于大脑边缘系统的杏仁核、海马等苯二氮卓受体，促进γ-氨基丁酸抑制性神经递质的释放，从而引起突触前和突触后的抑制作用有关，具有镇静、催眠、抗焦虑作用。但是长期使用可产生耐受性和依赖性，常见嗜睡、运动失调、头痛，甚至皮疹、白细胞减少、肝损伤、骨髓移植等不良反应。

作为中枢神经抑制药物，硝西泮属于处方药，患者必须在医生的指导下方能使用，国家药监部门对其生产、经营及使用进行了严格的规定。但是，一些不法分子利用硝西泮药物的镇静、催眠、抗焦虑的良好作用和中成药、保健食品成分复杂、毒副作用小的特点，在镇静催眠类中药制剂和保健食品中擅自添加硝西泮化学成分，夸大宣传功效，抬高价格；有人甚至把它作为动物饲料添加剂，使动物嗜睡少动而生长加快，动物体内蓄积的药物通过食物链进入人体，给人民群众的身体健康造成了严重危害。特别在广大的农村和经济欠发达的中小城市，由于这些地区缺乏必要的检验仪器，加上技术监管能力薄弱，给了不法分子更多的造假和添加之机，导致大量假药劣药出现，造成了中药制剂和保健食品市场的混乱。

检验镇静安神类中药制剂、保健食品中是否添加硝西泮成分的现有方法主要有以下四种：

1、薄层色谱法

样品中的待测成分经过甲醇提取，所得的供试品溶液与对照品溶液点在硅胶薄层板上，用展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视。在展开剂的作用下，由于不同物质的迁移速度不同，不同物质在薄层色谱板的不同位置以斑点的形式出现，根据待测样品是否在与对照品相应的位置上出现斑点这一实验所得的现象来判断待测样品是否含有目标成分。如果供试品溶液薄层色谱图与硝西泮对照品相应的位置上出现斑点，则提示样品中可能含有硝西泮成分。

薄层色谱法的优点是不需要昂贵的分析仪器。该法缺点是：(1)色谱分辨率较低，中药制剂成分复杂，干扰因素多，易将某些共存成分误判为硝西泮成分，某些共存成分如果量较大且色谱迁移值与待测成分接近，则会干扰目标成分的检出。(2)色谱展开和晾干的时间长，不足以满足快速测定的要求。(3)薄层色谱板需要烘干并干燥存放，环境温度和湿度对分离效果的影响较大。(4)需要有固定的场所，不适合作流动性大的现场检测。(5)要求实验人员有较好的经验。

2、高效液相色谱法

高效液相色谱法是常用的现代分析方法，在相同的色谱条件下，不同的物质有不同的色谱保留时间。在相同的色谱条件下硝西泮对照品溶液与样品提取所得供试品溶液分别进样，根据色谱峰保留时间可判断待测样品是否含有硝西泮成分。

高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高、灵敏度高。缺点是：(1)仪器价格昂贵，样品前处理时间长，色谱柱易受污染，分析成本高；(2)当共存的色谱峰保留时间与硝西泮色谱峰保留时间接近时容易做出错误的判断；(3)仪器对使用环境的要求高，需要固定放置，不适合流动性大的现场检测。

3、高效液相色谱-质谱联用法

以高效液相色谱仪作为分离器、质谱仪作为分析器的高效液相色谱-质谱联用法适合于成分复杂、背景干扰严重的样品分析，这种分析方法可提高检测结果的可靠性。

高效液相色谱-质谱联用法是一种分析成本比高效液相色谱更高、操作更加复杂的分析方法。仪器对使用环境的要求更高，需要固定放置，不适合做流动性大的现场检测。这些检验只能在少数实验室中进行，不易推广使用。

4、免疫层析色谱检测法

硝西泮胶体金检测试纸是由样品垫、结合释放垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和塑料底板组成。其检测原理是利用样品垫形成的毛细管虹吸效应，使被测物质首先与胶体金标记的硝西泮多抗发生竞争形式的结合，当胶体金标记的抗硝西泮多抗过量时，多余的多抗漂移到检测线，与硝西泮偶联抗原结合而显色。

免疫层析色谱检测法的试纸制备过程耗时至少3个小时，且需要专业人员制备硝西泮偶联多抗和抗硝西泮多抗，并且商品化的胶体金试纸造价不菲，实际推广应用存在很大难度。