[发明专利]CYP4F2和EPHX1基因SNP检测液相芯片以及特异性引物

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种CYP4F2和EPHX1基因检测液相芯片以及特异性引物。

背景技术

细胞色素P4504F2(Cytochrome P450，CYP4F2)是环境代谢酶细胞色素P450超家族成员之一，是人类肾脏代谢花生四烯酸(arachidonic acid，AA)产生20-羟二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid，20-HETE)最主要的酶，20-HETE具有收缩血管和调节离子稳态的重要作用，肾脏20-HETE合成的不足与高血压的发生关系密切，因此CYP4F2成为高血压发生的重要影响因素。研究表明，发生在CYP4F2的W12G和V433M突变将导致20-HETE比对照减少至56％-66％的量。其中，CYP4F2的W12G(rs3093105，T34G)即CYP4F2*2，而V433M(rs2108622，G1297A)发生在外显子2。

微粒体环氧化物水解酶(Microsomal epoxide hydrolase，mEH，EPHX1)是一种重要的生物转化的II相代谢酶，该酶由定位于人类染色体1q42.1的EPHX1基因编码，具有高度保守性。它催化多种环氧化中间产物水解为更易溶于水的反式二氢二醇排出体外。研究表明，EPHX1基因编码区的多态性通过影响蛋白质的稳定性而改变酶的活性。外显子3的T→C转变使Tyr113被His取代(rs1051740，T337C)，导致酶活性下降39％；外显子4的A→G转变使His139被Arg取代(rs2234922，A416G)，导致酶活性升高25％，有研究表明，EPHX1酶活的下降有利于预防肺癌，但此多态性与偶发性的结直肠癌的风险并不相关。

目前对CYP4F2和EPHX1多态性的检测产品一般是基于PCR技术的荧光定量PCR法、RFLP法和DNA测序法等，存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点，同时由于检测通量的局限性，不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种CYP4F2基因SNP检测液相芯片，该液相芯片可用于检测CYP4F2基因两种常见基因型G1297A和T34G的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下：

一种CYP4F2基因SNP检测液相芯片，主要包括有：

(A)针对CYP4F2基因的SNP位点，分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因SNP位点的特异性引物组成，所述特异性引物是：针对G1297A SNP位点的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、和/或针对T34G SNP位点的SEQID NO.15和SEQ ID NO.16；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQID NO.12；

(B)分别包被有特异的anti-tag序列的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列选自SEQID NO.25～SEQ ID NO.36中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对，且所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；

(C)用于扩增出具有G1297A和/或T34G的SNP位点的CYP4F2基因目标序列的扩增引物。

优选地，所述扩增引物为针对G1297A SNP位点的SEQ ID NO.37～SEQ ID NO.38，和/或针对T34G SNP位点SEQ ID NO.39～SEQ ID NO.40。

更优选地，所述ASPE引物对为：针对G1297A SNP位点的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.13组成的序列以及由SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.14组成的序列、和/或针对T34G SNP位点的由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.15组成的序列以及由SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.16组成的序列。

本发明的另一目的，是提供一种CYP4F2和EPHX1基因SNP检测液相芯片，该液相芯片可以对CYP4F2和EPHX1基因进行同步检测。

具体技术方案如下：

一种CYP4F2和EPHX1基因SNP检测液相芯片，主要包括有：