[发明专利]一种通过游离小孢子培养获得鸭茅单倍体植株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过游离小孢子培养获得鸭茅单倍体植株的方法。

背景技术

鸭茅，学名Dactylis glomerata L，又名鸡脚草、果园草，其野生种分布于我国新疆、天山山脉的森林边缘地带、四川的峨眉山、二郎山、邛崃山脉、凉山及岷山山系海拔1600～3100米的森林边缘、灌丛及山坡草地；并且散见于大兴安岭东南坡地。栽种鸭茅除驯化当地野生种外多引自丹麦、美国、澳大利亚等国。一种疏丛型牧草，寿命5～6年。为牛、马上等饲料。根系特别发达。茎秆直立，高约40～120厘米。基叶繁多，叶片扁长而柔软，边缘粗糙有刺。圆锥花序，小穗着生在穗轴的一侧，形似鸡脚，内、外稃均具纤毛。种子长卵形，黄褐色。喜温暖湿润气候，抗寒力中等，不耐高温和干旱。耐荫性强，多生长于山坡、路旁和林下。喜肥沃粘壤土；耐微酸，不耐碱。鸭茅草质柔软，牛、马、羊、兔等均喜食。幼嫩时尚可用以喂猪。叶量丰富，叶占60％，茎约占40％。鸭茅可作用放牧或制作干草，也可收割青饲或制作青贮料。

单倍体培养是用植物的组织细胞进行的育种方法，多用花药离体培养法。单倍体的产生，可以通过离体诱导，植物细胞具有潜在的再生性和全能性，能发育为完整植株，故应用组织培养技术对特定组织进行离体培养，可诱导产生单倍体。方法是将一定发育阶段的花药、子房或幼胚，通过无菌操作接种在培养基上，使单倍体细胞分裂形成胚状体或愈伤组织，然后由胚状体发育成小苗或诱导愈伤组织发育为植株。因为它们的二倍数染色体是由单倍数染色体本身加倍而来的，所以都是纯系，自交后代不会发生性状分离，因此进行单倍体培养在作物品种选育上，可加快纯合速度，提高选择效率。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种获得鸭茅单倍体植株的方法。

本发明所提供的获得鸭茅单倍体植株的方法，包括如下步骤：组织培养鸭茅的小孢子，得到鸭茅单倍体植株。

上述方法中，所述小孢子为处于如下发育时期的小孢子：小孢子的细胞核处于单核中期或单核晚期。

上述方法中，所述组织培养的方法包括如下步骤：1)培养所述小孢子，得到胚状体；2)培养所述胚状体，得到鸭茅单倍体植株。

上述方法中，所述步骤1)中，培养的条件为：温度为20℃-30℃、黑暗和培养时间为20天-30天；所述温度具体为20℃、25℃、30℃；所述培养时间为20天、25天、30天。

上述方法中，所述步骤1)中，所述小孢子的初始密度为10,000个/ml培养基-500,000个/ml培养基，具体为10,000个/ml培养基、100,000个/ml培养基、500,000个/ml培养基。

上述方法中，所述步骤2)中，培养的条件为：温度为20℃-30℃，光照时间为5小时/天-11小时/天，光照强度为20μmol/m²·s-80μmol/m²·s；所述温度具体为20℃、25℃或30℃；所述光照时间具体为5小时/天、8小时/天或11小时/天；所述光照强度具体为20μmol/m²·s、50μmol/m²·s或80μmol/m²·s。

上述方法中，所述步骤2)中，所述胚状体的长度为1mm-2mm。

上述方法中，在所述步骤1)后，步骤2)前，包括如下步骤：将步骤1)中得到的小于1mm长的胚状体继代培养至胚状体长度为1mm-2mm；所述继代培养的条件为：温度为20℃-30℃和黑暗；所述温度具体为20℃、25℃或30℃。