[发明专利]猕猴属灵长类动物精液超低温冷冻保存方法无效
| 申请号： | 201010198716.9 | 申请日： | 2010-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN101843238A | 公开（公告）日： | 2010-09-29 |
| 发明（设计）人： | 司维;牛昱宇;纪少珲;王宏;季维智 | 申请（专利权）人： | 昆明亚灵生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 昆明科阳知识产权代理事务所 53111 | 代理人： | 孙山明 |
| 地址： | 650500 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猕猴 灵长类 动物 精液 超低温 冷冻 保存 方法 | ||
1.猕猴属灵长类动物精液超低温冷冻保存方法，包括如下步骤：
(1)取0.2gTr i s、1.2g TES、2g乳糖、2g葡萄糖、0.2g棉籽糖、10000IU青霉素G钠盐、5mg硫酸链霉素依次溶于60mL Mil li-Q超纯水中，加入20mL鸡蛋卵黄，混合均匀后加水定容至100mL；
(2)将溶液以7000g离心1小时，收集上清液制成稀释液；
(3)取45mL稀释液加入5mL的甘油制成防冻液，预冷至4℃；
(4)在室温下，将精液与稀释液按1∶9的体积比在试管中混合、封口，以室温水浴，再放入4℃冰箱中缓慢降温平衡2小时；
(5)向试管中加入等体积的防冻液，混合均匀后分装入麦管中于液氮中保存；混合均匀后分装入0.25mL麦管中于液氮中保存；
(6)复苏时将冷冻麦管由液氮中迅速转移至37℃的水浴中解冻2分钟。
2.根据权利要求1所述的冷冻保存方法，其特征是所述方法步骤(4)的室温为22-25℃。
3.根据权利要求1、2所述的冷冻保存方法，其特征是所述方法步骤(5)是将防冻液分五次加入试管，每次加入1/5体积，每次间隔5分钟，甘油的终浓度为5％。
4.根据权利要求1、2所述的冷冻保存方法，其特征是所述方法步骤(5)是把麦管置于液氮面上方5cm处冷冻10分钟，降温速率为30℃/min，再于液氮中保存。
5.根据权利要求3所述的冷冻保存方法，其特征是所述方法步骤(5)是把麦管置于液氮面上方5cm处冷冻10分钟，降温速率为30℃/min，再于液氮中保存。
6.根据权利要求1、2所述的冷冻保存方法，其特征是所述方法步骤(5)麦管容积为0.25mL。
7.根据权利要求3所述的冷冻保存方法，其特征是所述方法步骤(5)麦管容积为0.25mL。
8.根据权利要求4所述的冷冻保存方法，其特征是所述方法步骤(5)麦管容积为0.25mL。
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