[发明专利]一种良种奶山羊多基因聚合的选育方法

权利要求书

1.一种良种奶山羊多基因聚合的选育方法，其特征在于，以连续产2羔及以上的奶山羊基因组DNA为模板，在PCR条件下，利用4对引物P1、P2、P3和P4，分别扩增催乳素受体基因和促黄体素beta亚基基因，其中：

所述的引物P1如下：

上游引物1F：5′-TGTCAGTAAGCGTCAGAGGGC-3′；

下游引物1R：5′-GGCTGGTGGAAGGTCACTCTT-3′；

所述的引物P2如下：

上游引物2F：5′-CTTACCACAACATTGCTGACG-3′；

下游引物2R：5′-GTTTAGCAGAGAACAAGGGGG-3′；

所述的引物P3如下：

上游引物3F：5′-CTTACCACAACATTGCTGACG-3′；

下游引物3R：5′-GTTTAGCAGAGAACAAGGGGG-3′；

所述的引物P4如下：

上游引物4F：5′-CTTACCACAACATTGCTGACG-3′；

下游引物4R：5′-GTTTAGCAGAGAACAAGGGGG-3′；

引物P1扩增催乳素受体基因内含子2，引物P2扩增催乳素受体基因外显子10，用于筛查山羊催乳素受体基因位点的突变；

引物P3扩增促黄体素beta亚基基因5′非翻译区，引物P4扩增促黄体素beta亚基基因外显子1，用于筛查山羊促黄体素beta亚基基因位点的突变；

根据琼脂糖凝胶电泳对4对引物扩增产物进行大小判定，然后采用DNA测序技术筛查到催乳素受体基因内含子2和外显子10，以及促黄体素beta亚基基因5′非翻译区和外显子1共有4个碱基的突变；

再利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对这4个位点的SNPs进行基因分型和基因频率分析，分析高产奶山羊个体多态性与产羔数的关系及不同基因型组合与产羔数之间的关系，并上溯亲代，跟踪子代，检测母羊个体的基因型组合与产羔数的关系，分析不同基因型在多胎性状形成中的贡献，挑选高产个体的基因型组合，分析高产个体基因型组合形成的选配方式，应用这些选配方式形成奶山羊多羔的多基因聚合良种核心群。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的PCR扩增的条件是：

12μL反应体系：包括0.25U Taq DNA聚合酶，6μL 2×Buffer，0.4μL的山羊基因组DNA样品，10pmol/μL的各引物的上、下游引物各0.4μL和灭菌超纯水4.7μL；

PCR反应程序如下：

1)利用引物P1的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸30s，共进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

2)利用引物P2的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，如此进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

3)利用引物P3的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，如此进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

4)利用引物P4的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，如此进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的催乳素受体基因内含子2在114bp存在C→T的突变，外显子10在319bp存在C→A的突变；所述的黄体素beta亚基基因的5′非翻译区在153bp存在C→A的突变，外显子1在64bp存在T→C的突变。