[发明专利]一种O/Asia I型口蹄疫病毒两价基因工程多肽疫苗及制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型的口蹄疫疫苗，特别是一种由基因工程方法生产的O/AsiaⅠ型口蹄疫病毒两价基因工程多肽疫苗及其制备方法和用途。 

背景技术

国内养殖规模不断扩大，将成为动物疫苗行业持续增长动力源。目前我国的肉类、蛋类产量均列世界第一位，是世界畜产品生产第一大国。2004年我国全年畜牧业产值首次突破1万亿元大关，畜牧业产值占农业总产值的比重在逐步提高。由于世界范围内疫情不断，口蹄疫、禽流感、疯牛病等，给世界各国的动物疫病防治与控制工作提出了挑战。口蹄疫(Foot and mouth disease，FMD)是畜牧业中偶蹄类动物(猪、牛、羊及骆驼)的一种急性、热性、高度接触性传染病。迄今为止，世界各国除北美、澳大利亚之外，都曾爆发过口蹄疫的大规模流行。这种疾病的流行曾对德国(1937-1938)、欧洲(1951-1952)、土耳其(1964-1965)、英国(1967-1968)、奥地利(1973)、法国(1974)、韩国(2002)等国家造成巨大的经济损失。 

口蹄疫的临床诊断特点为口腔粘膜、蹄部和乳房的皮肤发生水疱和溃烂，由口蹄疫病毒引起，对于畜牧业，猪、牛及羊的饲养及畜产品的贸易危害极大。口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus，FMDV)属于细小RNA病毒，对猪、牛及羊传染途径多，毒力强，一头病牛的排毒量可感染100万头牛，1克病猪蹄部水疱皮可使10万头猪感染发病。易于传播，传播迅速，流行面广，生产性能下降，防治费用高，发病率100％，成年畜死亡率一般1-2％，但幼畜高达50％，甚至100％。往往几个省，几大洲甚至全球同时发生。直接接触和间接接触传播均可，主要经消化道传播，还可经呼吸道传播，往往牛、羊、猪在同一时间内发病，具有感染多种动物的能力以及具有多种抗原形式，流行可呈跳跃式传播，一年四季均可发生，每隔1-2年或3-5年就流行一次。近年来，猪发生有扩大的趋势。FMDV的初级复制是在咽部，然后感染邻近的淋巴结并且进入血流，进而扩散到各种器官和组织中。大 多数情况下，动物感染2-14天出现临床症状。较年长的动物感染FMDV后很少出现死亡，但动物的生殖能力、生长和健康受到很大影响。国际兽疫局将FMDV列为A类烈性传染病。FMDV一旦发生，难以控制，每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于口蹄疫传播迅速、难于防治、补救措施少，被称为畜牧业的“头号杀手”，对于畜牧业是毁灭性打击。根据世界动物卫生组织规定，一旦出现口蹄疫疫情，当事国将自动丧失非口蹄疫疫区资格。 

口蹄疫病毒具有显著的抗原多样性，目前发现的FMDV有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型。每种血清型还可以继续分成多种亚型。中国原为O型口蹄疫流行区。西北及东北地区的周边国家是O型及AsiaⅠ型口蹄疫流行区。FMDV颗粒中含有一条正链极性的、由8500个核苷酸组成的单链RNA。病毒颗粒的囊膜包括包绕单链RNA的四种结构蛋白VP1(分子量34000)、VP2(分子量30000)、VP3(分子量26000)、VP4(分子量13500)。四种结构蛋白每种60个分子构成一个二十面体病毒粒子。二十面体的顶点由结构蛋白VP1的免疫决定簇区域为141-160区域和200-213区域。 

对于FMD，注射疫苗是目前预防口蹄疫的最有效手段。现有疫苗及其存在的问题有： 

1、减毒疫苗及灭活疫苗： 

传统的减毒疫苗及灭活疫苗是利用大量培养动物细胞，然后感染口蹄疫病毒，经过培养、分离病毒，再用化学试剂使病毒灭活后制备而成。法国Merieux公司是最大的灭活FMDV疫苗生产厂家。但制备灭活FMDV需要特殊严格的隔离封闭的环境进行生产，以防泄露并污染周围环境，安全性要求高，这种潜在的危险限制了这种疫苗必须在偏僻的环境生产；此外，疫苗的贮藏运输保存需要冷链，增加成本；灭活FMDV疫苗的效价变动较大，疫苗还存在复强和残存的痕迹活病毒引起疾病流行和大规模爆发的危险；另外，疫苗的质量还经常会影响奶牛的乳液分泌；使用灭活的FMDV疫苗虽然不常发生过敏性休克或昏迷，但一旦发生就足以造成严重后果；最后，首次免疫要2周至2个月内用二次，以后每隔6个月注射一次。免疫预防工作量非常大。 

2、多肽疫苗：